[发明专利]生产能够水解叶绿素或叶绿素衍生物的重组酶的方法

权利要求书

1.一种生产能够水解叶绿素或叶绿素衍生物的重组酶的方法，其包括所述重组酶在真核宿主细胞中的细胞内表达的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞为真菌细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述宿主细胞来自木霉属(Trichoderma)。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述重组酶为叶绿素酶。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述酶包括选自GHSXGG(SEQ ID NO：36)、DPVXG(SEQ ID NO：37)和YGHXD(SEQ ID NO：38)的一个或多个氨基酸序列。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述重组酶来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)、甘蓝(Brassica oleracea)、蓖麻(Ricinus communis)、银杏(Ginkgo biloba)、毛果杨(Populus trichocarpa)、葡萄(Vitis vinifera)、毛竹(Phyllostachys heterocycla)、高粱(Sorghum bicolor)、橹豆(Glycine max)、发财树(Pachira macrocarpa)、普通小麦(Triticum aestivum)、甜橙(Citrus sinensis)、玉米(Zea mays)、藜(Chenopodium album)、北美云杉(Picea sitchensis)或莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述重组酶包含如在SEQ ID NO：1至18的任意一个中所定义的多肽序列或其功能性片段或变体，所述其功能性片段或变体在至少50个氨基酸残基上与SEQ ID NO：1至18的任意一个具有至少75％的序列同一性。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述重组酶由在SEQ ID NO：19至35的任意一个中所定义的核酸序列或其功能性片段或变体编码，所述其功能性片段或变体在至少50个核苷酸残基上与SEQ ID NO：19至35的任意一个具有至少75％的序列同一性。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括裂解所述宿主细胞和从所述裂解物回收所述重组酶。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述宿主细胞暴露于洗涤剂、有机酸、均化和/或热处理。

11.一种真核表达载体，包含编码能够水解叶绿素或叶绿素衍生物的酶的核酸序列，所述序列可操作地连接到适于引导所述酶在真核宿主细胞中的细胞内表达的一个或多个控制序列。

12.根据权利要求10所述的表达载体，包含如在SEQ ID NO：19至35的任意一个中所定义的核酸序列或其功能性片段或变体，所述其功能性片段或变体在至少50个核苷酸残基上与SEQ ID NO：19至35的任意一个具有至少75％的序列同一性。

13.一种真核宿主细胞，包含如权利要求10或权利要求11所述的表达载体。

14.根据权利要求12所述的宿主细胞，其为真菌细胞。

15.一种能够水解叶绿素或叶绿素衍生物的重组酶，其通过如权利要求1至9中任一项所述的方法获得。

16.根据权利要求14所述的重组酶，其中所述重组酶包含如在SEQ ID NO：1至18的任意一个中所定义的多肽序列或其功能性片段或变体，所述其功能性片段或变体在至少50个氨基酸残基上与SEQ ID NO：1至18的任意一个具有至少75％的序列同一性。