[实用新型]一种半叶法测定烟草花叶病毒侵染性的接种器

说明书

技术领域

本实用新型属于一种农业技术所用的器械，涉及烟草病毒病的接种用具，具体涉及一种半叶法测定烟草花叶病毒侵染性的接种器，该接种器适用于准确、快速对烟草花叶病毒病(TMV)的针刺接种。

背景技术

接种试验是植物病害研究中重要的工作，在研究植物对病原物抗性、病害循环、病害流行、病害控制、侵染过程和病害防治等各个方面，接种是试验的前提。烟草花叶病毒病(Tobacco Mosaic Virus，TMV)、烟草黄瓜花叶病毒病(Cucumber Mosaic Virus，CMV)和烟草马铃薯Y病毒病(Potato Virus Y，PVY)是烟草上最主要的病毒病。特别是烟草花叶病毒，它是世界范围内普遍发生的一种可侵染22科198种植物的病毒病，烟草感染后造成品质和产量下降，甚至绝收，给农业生产带了严重的经济损失，研究该病害的侵染性具有重要意义。由于植物病毒是绝对内寄生病原，只能在活体植物细胞内繁殖，而在研究一些抗病毒物质时候则需要利用植物叶片的半叶做相互对照，因此半叶法接种是植物病毒病研究中非常重要的研究方法。

现有的机械摩擦传染的烟草病毒病接种材料及方法，主要有病株汁液摩擦接种法、喷枪接种法、病组织直接接种法等三种。就目前的烟草病毒病多种接种方法而言，上述每种接种方法存在一定的问题，共同的缺点是接种程序繁杂，接种效率低，接种速度慢，植株间接种病毒量误差大，不能满足短时间内病毒大量接种的要求。如病株汁液摩擦接种法是最常用的接种法，其步骤是取病叶组织加少量的pH＝7.0的磷酸缓冲液在研钵中研碎，纱布过滤并挤出汁液，最后磷酸缓冲液稀释至1∶100质量体积比备用。接种时，待用病毒接种液中加入少量细金刚砂或在接种的叶面上撒上少量金刚砂作为磨料，然后用手指、纱布、毛笔或小的扁刷等，蘸取待用病毒接种液在叶片上来回轻轻摩擦，再用清水将叶面多余的病毒接种液和磨料轻轻洗去。其缺点是程序繁琐，费时费力，植株间接种病毒量误差大，特别是在大面积接种和材料多的时候尤为明显。而喷枪接种法是在待用病毒接种液中加金刚砂，在相同的时间内，用相同的喷射压力，将含有少量金刚砂的待用病毒接种液打在被接种的病株上，实现接种，其缺点是操作难度较大，相同时间和相同压力的控制缺乏一定的可操作性；喷枪设备昂贵，增加了试验成本。病组织直接在叶面上接种，又称“干接法”，适用于少量接种或病组织材料较少和病毒不稳定的情况，其缺点是无法进行大量接种试验、传染率较低和植株间接种病毒量误差大。

目前针刺接种法尚缺乏高效简便的针刺接毒工具，因此设计一种方便快捷、准确一致、高效的接种工具对病毒接种、病毒侵染研究、抗病毒药物筛选及后续研究具有重要意义。

发明内容

针对目前病毒接种方法及工具中存在的接种效率低，不同叶片间误差大、接种效果不稳定，接种工具使用不方便等问题，本实用新型的目的在于，提供一种半叶法测定烟草花叶病毒侵染性的接种器。

为了实现上述任务，本实用新型采用如下的技术解决方案予以实现：

一种半叶法测定烟草花叶病毒侵染性的接种器，包括由A片和B片以及弹簧所构成的塑料夹，其特征在于，在塑料夹的A片上有半叶型接种板和病毒接种液固定件，其中，半叶型接种板上均匀分布有接种针；在塑料夹的B片上有和半叶型接种板相匹配的接种垫，在接种垫上均匀分布有和接种针相对应的针刺穿孔。

本实用新型的其它一些特点是：

所述的病毒接种液固定件为覆有病毒接种液的海绵或棉纱。

所述的接种针为昆虫解剖针。

所述的接种垫中的针刺穿孔的直径为0.3mm。

所述的接种板中的接种针之间的间距为3mm。

所述的接种垫和半叶型接种板均选用橡胶板制作。

采用本实用新型的半叶法测定烟草花叶病毒侵染性的接种器，按以下步骤进行操作：

a)将烟草花叶病毒病病叶和pH＝7.0的磷酸缓冲液按1∶100的质量体积比配置，研磨过滤后获得病毒接种液；

b)将病毒接种液固定件浸泡病毒接种液后覆盖在接种板上，接种针的针尖穿过病毒接种液固定件外露；

c)将烟草叶片置于接种带的A片接种板和B片的接种垫中间，使接种针穿过叶片进入B片接种垫的针刺穿孔中，将稍加挤压，将病毒接种液固定件中的烟草花叶病毒接种液接种于叶片中。

在具体应用过程中：浸沾一次病毒接种液的病毒接种液固定件可以接种5～7张烟草叶片。

本实用新型的半叶法测定烟草花叶病毒侵染性的接种器，结构简单，性能好，轻便易携，同时具有准确、一致、高效和快速接种特性。