[实用新型]快速联检耐盐HIN和IrrE蛋白的金标试剂盒

说明书

技术领域：

本实用新型涉及一种快速联检耐盐HIN和IrrE蛋白的金标试剂盒。

背景技术：

在转基因植物的研制开发或在对转基因产品进行筛选或安全性评价时，往往需要对转入的外源性基因进行定性或半定量测定。

HIN蛋白和IrrE蛋白均来自极端辐射抗性的耐辐射异常球菌R1(Deinococcus radiodurans R1)，HIN蛋白属于LEA2家族成员，对胚乳发育和植物生长器官的渗透胁迫有保护作用。IrrE蛋白编码基因(irrE)是耐辐射球菌R1中的全局调控因子，参与各种胁迫反应，在植物抵御高盐等非生物胁迫的过程中发挥着重要作用。

研究表明，基因的表达均能显著增强大肠杆菌的耐盐能力。分别将hin和irrE基因导入植物后，明显提高了植物的耐盐能力，最高可耐受350mmol盐浓度。目前，HIN蛋白编码基因已转入油菜、玉米；而IrrE蛋白编码基因已转入玉米、棉花、烟草、油菜等作物。因此，实践中往往需要对转基因植物样本进行两种基因的检测。

现有的检测技术如酶免、放免等方法，受仪器(酶标仪、放免闪烁仪、离心机等)、场地等因素的限制，而且检测时间长(酶免检测时间需20h、放免需30min-1h)，检测成本较高，很难推广应用。

已有试纸条检测的方法虽可部分克服以上不足，但每种试纸条只能检测转基因作物中单一的外源基因，实际操作中容易产生错误结果。例如：如果检测者仅有HIT检测试纸条，而检测对象中并未转入HIN基因，而是转入IrrE基因，那么很可能会得出检测对象不存在外源基因的错误结果，造成不必要的损失。而且在操作时，需要将试纸条浸入待检测的液体中，操作不是很方便。

因此，实践中很需要有一种可同时检测转基因植物中HIN蛋白和IrrE蛋白，且操作简便、结果准确可靠、快速的装置。

发明内容：

本实用新型的目的是建立一种操作简便、结果准确可靠、快速，并能同时检测2种不同转基因成分(HIN和IrrE蛋白)的免疫检测试剂盒。

本实用新型的技术方案是这样的：

一种快速联检耐盐HIN和IrrE蛋白的金标试剂盒，包括底板和上盖，底板盖入上盖后组成试剂盒，其特征在于底板上表面的两侧各分别设置有检测HIN蛋白和IrrE蛋白的测试带；上盖的两侧各分别有一个观测窗和一个加样孔。

底板的厚度不限，其上表面可以设置2条凹槽，每条凹槽内嵌入1条测试带。

所述底板或上盖可具有卡槽，以保证底板与上盖扣紧。

所述观测窗优选是长方形。

试剂盒的形状为扁平的盒状，盒的上表面的形状优选为两个连接在一起的梯形。

所述底板内的2条测试带，一条用于检测HIN蛋白，另一条用于检测IrrE蛋白。所述测试带是一种具有检测系统主体膜反应体系功能的检测材料，由高分子纤维膜、塑料等多层材料制成。2种蛋白的测试带均可分为质控区和检测区，质控区可包被羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG多克隆抗体；HIN蛋白测试带的样品检测区包被特异功能性HIN的单克隆抗体或多克隆抗体，IrrE蛋白测试带的样品检测区包被IrrE的单克隆抗体或多克隆抗体。

当外源基因转入植物，并在植物中表达，将产生目的蛋白(HIN和IrrE)，因此通过检测样品中是否含有上述两种蛋白来确定该基因是否存在。如果外源基因转入植物，发生基因沉默，无目的蛋白产生，将不能达到预期目的(耐盐)。

本实用新型的目的是这样实现的：

当底板盖入上盖后，每个观测窗和加样孔各分别对应一条测试带，通过盒盖上的加样孔和观测窗可进行加样和观察检测结果，每个观测窗可分别检查一种基因。

每个观测窗分为测试区(T)和质控区(C)两部分，可在上盖上用字母C、T标示出；

检测时，将送检物品的同一种提取液分别滴加在试剂盒的2个加样孔中，3-5min后，通过肉眼就可以通过上盖的观测窗直接观察到准确的检测结果。

对于每个观测窗来说，用以下方式判断检测结果：

1、阴性(-)：

反应状况：观测窗质控区(C)出现一条紫红色条带。

检测结果：待检样品中不含待检基因或其含量在其阈值以下。

2、阳性(+)：

反应状况：观测窗质控区(C)出现一条紫红色条带，在测试区(T)内同

时出现紫红色条带。检测结果：待检基因含量在阈值以上。

3、无效：

反应状况：质控区(C)未出现紫红色条带，

检测结果：表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。

本实用新型所述试剂盒的优点在于：