[发明专利]一种葡萄糖异构酶的固定化方法有效
| 申请号： | 201210581801.2 | 申请日： | 2012-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN102994490A | 公开（公告）日： | 2013-03-27 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;张帆;邓辉;陈晟;陈坚 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N11/10 | 分类号： | C12N11/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 何自刚;王玉松 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 葡萄糖 异构酶 固定 方法 | ||
1.一种葡萄糖异构酶的固定化方法，其特征在于，步骤如下：1）在初始培养基中添加适量的Co2+发酵生产葡萄糖异构酶；2）将步骤1）中所述发酵液与壳聚糖溶液混合使菌体絮凝；3）向絮凝物中加入戊二醛进行交联，挤压成型后烘干过夜。
2.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组大肠杆菌是将xylA/pMD18-T和质粒pET24a（+）进行双酶切，连接酶连接过夜，连接产物转化E.coli JM109感受态细胞，得到含有葡萄糖异构酶基因的重组质粒xylA/pET24a(+),将重组质粒xylA/pET24a(+)导入宿主E.coliBL21(DE3)中，所得的重组大肠杆菌xylA/pET24a/BL21(DE3)作为生产菌种。
3.权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤如下：
1）向重组大肠杆菌xylA/pET24a/BL21(DE3)发酵初始培养基中添加0.5-6mM的Co2+，培养至菌体浓度OD600约为9-10；
2）向发酵液中添加0.1-0.8%的硅藻土；
3）将步骤2）得到的发酵液与0.01-0.1%的壳聚糖溶液混合，静置使菌体絮凝；
4）向絮凝物中加入0.2-3%戊二醛进行交联，交联一定时间后弃去上清液，挤压成型后烘干。
4.权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，发酵初始培养基为：甘油5g/L，蛋白胨12g/L，酵母粉24g/L，KH2PO4 2.31g/L，K2HPO4·3H2O 16.43g/L。
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