[发明专利]高密度培养裂壶藻的方法

说明书

 

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及高密度培养裂壶藻的方法。

 

背景技术

裂壶藻又称裂殖壶菌，属于真菌门（Eumycota）、卵菌纲（Oomycetes）、水霉目（Saprolegniales）、破囊壶菌科(Thraustochytriaceae)的一类海洋真菌，单细胞、球形。裂壶藻细胞积累大量对人体有用的活性物质，如：油脂、色素、角鲨烯等，其中油脂占细胞干重的70%以上，总脂中DHA含量非常高，结构类似的脂肪酸含量低，容易分离纯化，而且没有鱼腥味。是一种有潜力的DHA原料。现有培养裂壶藻的方法普遍存在生物量不高的问题。

 

发明内容

为了克服现有技术领域存在的上述缺陷，本发明的目的在于，提供一种高密度培养裂壶藻的方法，解决现有技术培养裂壶藻的方法普遍存在生物量不高的问题。

本发明提供的高密度培养裂壶藻的方法，包括以下步骤：

一、菌种活化，将保藏于-70℃的菌种转接于斜面培养基，25℃培养3—4天；

二、制备豆粕水解物，取 32g 豆饼粉加入65ml1M的HCl，定容至250ml，120℃高压水解25分钟，加入50 ml1M的NaOH 溶液，6000rpm离心8分钟，上清液用1M的NaOH溶液调pH至7.0，6000rpm离心8分钟除去沉淀定容至800ml，得到的溶液即为 40g/L的豆粕水解液；

三、种子培养，一级种子：将活化的斜面菌种接入装有100mL种子培养基的 500mL三角瓶，25℃、200rpm培养2天；二级种子：取4ml一级种子，接入装有 100mL种子培养基的 500mL三角瓶，25℃、200rpm培养2天；

四、摇瓶培养，取4mL二级种子液接入装有100mL发酵培养基的 500mL三角瓶，25℃、 200rpm培养5天；

五、10L发酵罐培养，将培养好的液体种子，按4%接种量接种于发酵培养基中，在25℃和4L/min的通气量下培养3天，通过流加2mol/LHCI或2mol/LNaOH自动控制发酵液pH；

六、500L发酵罐培养，将培养好的液体种子，按10%接种量接种于发酵培养基中，在25℃和通气比3.48 L min^-1L^-1的通气量下培养4天，通过流加2mol/LHCI或 2mol/LNaOH自动控制发酵液pH。

所述斜面培养基为60 g/L 葡萄糖，40 g/L 豆粕水解物，20g/L琼脂，50% v/v 天然海水，pH 6.0；所述步骤三或四或五所用发酵培养基为60 g/L 的葡萄糖，40 g/L 豆粕水解物，50% v/v 天然海水，pH 6.0；所述步骤六所用发酵培养基为125g/L葡萄糖，10g/L酵母膏，59/L大豆蛋白胨，适量自然海水。

本发明提供的高密度培养裂壶藻的方法，其有益效果在于，方法简单易操作，成本低，生物量高。

 

具体实施方式

下面结合一个实施例，对本发明提供的高密度培养裂壶藻的方法进行详细的说明。

 

实施例

本实施例的高密度培养裂壶藻的方法，包括以下步骤：

一、菌种活化，将保藏于-70℃的菌种转接于斜面培养基，25℃培养3—4天；

二、制备豆粕水解物，取 32g 豆饼粉加入65ml1M的HCl，定容至250ml，120℃高压水解25分钟，加入50 ml1M的NaOH 溶液，6000rpm离心8分钟，上清液用1M的NaOH溶液调pH至7.0，6000rpm离心8分钟除去沉淀定容至800ml，得到的溶液即为 40g/L的豆粕水解液；

三、种子培养，一级种子：将活化的斜面菌种接入装有100mL种子培养基的 500mL三角瓶，25℃、200rpm培养2天；二级种子：取4ml一级种子，接入装有 100mL种子培养基的 500mL三角瓶，25℃、200rpm培养2天；

四、摇瓶培养，取4mL二级种子液接入装有100mL发酵培养基的 500mL三角瓶，25℃、 200rpm培养5天；

五、10L发酵罐培养，将培养好的液体种子，按4%接种量接种于发酵培养基中，在25℃和4L/min的通气量下培养3天，通过流加2mol/LHCI或2mol/LNaOH自动控制发酵液pH；