[发明专利]一种原发性胆汁性肝硬化的特异性自身抗体及应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域，具体地说，涉及一种原发性胆汁性肝硬化的特异性自身抗体、其相应抗原和它们的应用。 

背景技术

原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)是一种慢性、进行性胆汁淤积性肝脏疾病，一般认为与自身免疫有关。病变特点是以肝内小胆管的非化脓性炎症为特征。PBC在中老年女性中多见，男女比例为1：8。目前该病尚无治愈的方法,但早期及时治疗能改善生化指标及肝脏组织学病变,从而延缓病情进展,一旦进入晚期,则肝移植为唯一可行的治疗手段,因此早诊断早治疗至关重要。但因该病早期临床表现不典型及临床重视程度不够、诊断水平等原因，近年来，该病在城市人口中有增高的趋势。PBC的具体病因与发病机制仍不清楚，该病常合并其他器官自身免疫性疾病。在该病中几乎所有患者均存在特异性自身抗体和自身反应性T细胞反应，因此被称为是一种器官特异性的自身免疫性疾病。抗线粒体抗体(antimitochondrialautoantibodies,AMA)是该病的主要诊断指标，但仍有部分患者该抗体阴性，极易误诊。因此，寻找PBC患者除AMA、抗核抗体(antinuclearantibodies,ANA)以外一种新的自身抗体及其靶抗原，分析其在PBC患者中的临床意义，探讨其与PBC发病机制的关系，以期有助于PBC患者的早期诊断、早期治疗以及预后的判断。 

近年来国外研究发现在PBC中存在一种新的自身抗原成分，它可以共价的连接Sp100和PML蛋白，被称为微小泛素相关的修饰因子(small ubiquitin-related modifiers,SUMO)。SUMO-1和SUMO-2及SUMO-3蛋白是存在于其他核点蛋白中的特殊蛋白质。它们能够通过 相似的泛素结合途径，共价的连接到其他细胞蛋白上，但并不形成泛素化。SUMO结合的蛋白并不会导致其降解，而是稳定的结合靶蛋白及调节细胞的结构和功能。有研究显示，在99例抗Sp100和PML抗体阳性的PBC患者中可检测到抗SuMO-2和SUMO-1抗体，其在PBC中的阳性率为42%和15%。但在抗核点抗体阴性的PBC患者中并没有发现抗SUMO抗体，因此认为抗SUMO抗体也是PBC的一种新型自身抗体类型。最近Alessandro Granito等首次报道Sp140是一种新的、高度特异的PBC自身抗原。对135例PBC患者和157例疾病对照组（自身免疫性肝炎、原发性硬化性胆管炎、系统性红斑狼疮）血清抗Sp140抗体进行检测阳性率为15%（20/135），而在疾病对照组中未检测到，由此可见，抗Sp140抗体是PBC高度特异的自身抗体。在AMA阴性的PBC患者中抗Sp140抗体的阳性率（53%）显著高于AMA阳性的PBC患者（9%）。AMA是PBC诊断的重要血清学标志，超过90%的PBC患者出现AMA，仍有10%PBC患者AMA为阴性；而抗gp210、抗LBR、抗P62、抗Sp140抗体仅出现在少部分PBC患者，因此，寻找新的特异性的自身抗体对PBC患者的早期诊断有重要意义，有助于对AMA阴性的PBC患者的诊断，以及AMA阳性的PBC患者的诊断，同时特异性抗原的鉴定是研究PBC发病机制的条件之一，有助于与其它自身免疫病的鉴别诊断。 

发明内容

本发明的目的是提供一种原发性胆汁性肝硬化的特异性自身抗体、其相应抗原和它们的应用。 

为了实现本发明目的，本发明的一种原发性胆汁性肝硬化的特异性自身抗体和相应抗原，所述特异性自身抗体是以胆管癌细胞RBE总蛋白作为抗原，利用免疫印迹法检测原发性胆汁性肝硬化PBC患者血清，检测到针对分子量约20kD蛋白（即，相应抗原）的自身抗体，将其命名为Sp20抗体，然后利用双向电泳从PBC患者血清中分离得到 该Sp20抗体。 

利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法对Sp20进行鉴定。 

间接免疫荧光法检测抗Sp20抗体荧光模型，对结果进行分析。 

对比抗Sp20抗体阳性与阴性PBC患者在临床表现、生化免疫指标、自身抗体、肝脏病理分期、对UDCA的治疗反应及预后进行比较等方面指标，分析抗Sp20抗体的临床意义。 

本发明还提供上述的Sp20抗体在制备诊断原发性胆汁性肝硬化试剂盒中的应用。 

本发明提供了一种新的PBC特异性自身抗体，通过研究其在PBC发病中的机制，为PBC患者早期诊断、早期治疗及预后的判断提供理论依据。有助于对AMA阴性的PBC患者的诊断，以及有助于与其它自身免疫病的鉴别诊断。为临床研发新的PBC诊断试剂提供科学依据。 

附图说明