[发明专利]采用离子交换树脂对紫芝液体深层发酵菌丝体粗多糖进行脱色的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药化学领域，具体涉及一种采用离子交换树脂对紫芝液体深层发酵菌丝体多糖液进行脱色的方法。

背景技术

紫芝(Ganoderma sinense)是我国名贵中药灵芝的一种(国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]2010年版一部北京：中国医药科技出版社，2010：174)，是祖国中医药宝库中的珍品，素有″仙草″之誉。古今药理与临床研究均证明，紫芝确有防病治病、延年益寿之功效。东汉时期的《神农本草经》、明代著名医药学家李时珍的《本草纲目》，都对紫芝的功效有详细的极为肯定的记载。现代药理学与临床实践进一步证实了紫芝的药理作用，大量研究表明紫芝多糖是其主要活性成分之一，具有免疫调节、抗肿瘤(杨国红，杨义芳，金隽迪.紫芝液体深层发酵液的抗肿瘤活性部位研究[J].中草药，2008，39(6)：877-880)、抗氧化、抗病毒、降血糖和保肝等药理作用，并证实紫芝多糖是紫芝扶正固本、滋补强壮、延年益寿的主要成分。

紫芝多糖产品颜色深、色素较多，严重影响多糖的纯度、色度、生物活性，也阻碍了对多糖结构与其生物活性关系的深入研究，因此在纯化过程中应当进行脱色(罗玺，唐庆九*，张劲松，等.灵芝多糖树脂法脱色工艺优化[J].食品科学，2011，32(16)：5-10)。传统脱色方法一般有活性炭吸附、双氧水氧化法等，其中活性炭法脱色时间较长，多糖保留率低，双氧水是强氧化剂，容易破坏多糖结构，影响其活性(袁红波，张劲松，贾薇，等.利用大孔树脂对低分子量灵芝多糖脱色的研究[J].食品工业科技，2009，30(3)：204-206)。

大孔树脂脱色技术近年来常应用于中草药有效成分的脱色。大孔树脂具有物理化学稳定性高、比表面积大、处理能力大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、成本不高等诸多优点，因此可利用树脂的选择性吸附功能将多糖中的色素除去。国内外文献大多采取正交试验模型对灵芝多糖脱色工艺进行优化，而基于响应面法(response surface methodology，RSM)对紫芝发酵多糖脱色优化工艺的报道尚未出现。

发明内容

本发明在单因素试验的基础上，利用响应面分析法对紫芝发酵多糖脱色工艺进行优化，并结合实际生产条件，确定合理的脱色工艺参数，旨为后续紫芝多糖的分离纯化和活性研究提供基础，同时为脱色产业化提供一定的理论依据。

因此，本发明提供一种采用离子交换树脂对紫芝液体深层发酵菌丝体粗多糖进行脱色的方法，包括如下步骤：

a)对紫芝液体深层发酵菌丝体粗多糖进行预处理，得到分子量范围为30KD～300KD的精制紫芝多糖；

b)将步骤a)获得的精制紫芝多糖置于离子交换树脂，在脱色时间2～4h，树脂用量0.25g～0.75g/10ml，脱色温度25～35℃、pH值6～7的脱色条件下进行脱色，得到脱色之后的紫芝多糖。

本发明所使用的术语“紫芝液体深层发酵菌丝体粗多糖”是指利用液体深层发酵技术从菌丝体中提取的紫芝粗多糖。具体制备方法为将发酵完成的放罐液进行板框过滤，弃去胞外液，取过滤后菌丝体；将菌丝体用去离子水洗涤，洗至板框滤出液为无色透明并不再产生气泡，过滤称重，将洗涤过滤后的菌丝体称重，按菌丝体重量加适量倍数去离子水，置浸泡罐以一定时间加热提取数次后于板框过滤分离，提取液经过刮板浓缩及单罐浓缩至一定量后加该浓缩液适量倍数质量的85％乙醇于4℃放置12h；将醇沉物置离心机1200r/min离心分离，取沉淀物；将湿醇沉物装盘后放入箱式烘干器，控制真空度加热至30～40℃烘干2h后取出醇沉物，粉碎；粉碎后重新装盘，再放入烘箱，缓慢升温至65℃烘干2h，最后得紫芝液体深层发酵菌丝体粗多糖。

根据本发明一个优选的实施方式，步骤a)所述的预处理包括如下步骤：

1)将紫芝液体深层发酵菌丝体粗多糖按液料比150∶1～250∶1溶解于水中；

2)以4000～5000rpm/min的速率离心两次或两次以上，取上清液，每次离心20～40min；

3)上清液在温度20～40℃、压力0.02～0.06Mpa条件下过30KD中空纤维超滤膜，截留液稀释后过300KD中空纤维超滤膜，超滤液浓缩冷冻干燥后，得精制紫芝多糖。

本发明所使用的术语“液料比”是指“液”的体积除以“料”的质量，这里“液”指水，单位用ml，“料”指紫芝粗多糖，单位用g。

根据本发明一个特别优选的实施方式，步骤1)中所述液料比为180∶1～220∶1，更优选200∶1。