[发明专利]心型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种心脏标志物含量的检测试剂盒，尤其涉及心型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒及其制备方法.本发明还涉及该心型脂肪酸结合蛋白测定试剂盒在检测人体心型脂肪酸结合蛋白含量的使用方法，属于心型脂肪酸结合蛋白含量的检测领域。 

背景技术

急性冠脉综合征(ACS)是冠心病中重要的急性事件之一，主要分为急性心肌梗死(AMI)、不稳定心绞痛(UA)以及心源性猝死(SCD)，其发病率和病死率均较高。但若能在发病后及早辨别高危患者并进行再灌注治疗，则病死率及预后将会有明显改善。其中，心脏标志物在ACS的诊断及预后过程中，扮演着至关重要的角色。 

近年来，急性心肌梗死（AMI）的标志物研究取得很大进展。血清酶学指标在AMI诊断、预后、疗效评估等方面的应用价值已被公认，肌红蛋白（MYO）、心肌钙蛋白T（cTnT）和心肌钙蛋白Ⅰ（cTnl）在临床应用也十分广泛。最近，又有一个AMI的标志蛋白—心型脂肪酸结合蛋白（heart fatty acid-binding protein,H-FABP）受到重视和关注。心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）是心脏中富含的一种新型小胞质蛋白。它具有高度心脏特异性，它是心脏最丰富的蛋白质之一，但在心脏以外的组织中也有低浓度表达。心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）由132个氨基酸组成，分子量为15kDa。心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因位于染色体I上。H-FABP结合两个脂肪酸分子并参与脂肪酰基辅酶A的运输，活跃于氧化过程，从而在线粒体中产生能量。 

在心肌缺血损伤出现后，H-FABP可以早在胸痛发作后1～3小时出现于血液中，6～8小时达到峰值，而且血浆水平在24～30小时内恢复正常。与其它几种常用心脏标志物于心肌损伤后出现在血液中的时间和浓度变化对比发现，在心肌损伤早期(6小时内)，较其它心脏标志物而言，H-FABP和MYO在诊断评估方面具有明显的时间优势。其中，MYO也是一种低分子量细胞质蛋白，由于在炎症、局部缺血、SLE、休克及皮肌炎等情况下亦会引起MYO的血液浓度升高，从而导致其作为心肌细胞损伤的诊断指标特异性较低。综合考评各急性心肌梗死（AMI）的标志物，H-FABP具有许多优良的特性。 

目前，H-FABP的测定方法有酶联免疫法（ELISA）、放射免疫法（RIA）、免疫层析等，但这些检测方法都存在一些缺陷，限制了它们的在临床诊断中的大规模应用，如：酶联免疫法检测耗时长，操作繁琐，重复性差；放射免疫法需要使用特定的仪器且有放射性物质污染；免疫层析多用于定性检测，且该方法灵敏度较低。胶乳增强免疫比浊法具有操作简单、快速、灵敏度高、可应用于自动生化分析仪等优点，现在市场上虽然也有一些H-FABP的试剂盒是基于胶乳增强免疫比浊法，但是这些试剂或多或少的存在检测线性范围不够宽、检测灵敏度不够、试剂存放稳定性差、检测过程中抗干扰能力差等问题。 

因此，现急需研究开发一种基于胶乳增强免疫比浊法的检测试剂盒，克服上述的各种缺陷，使H-FABP在急性心肌梗死的临床诊断上得以大规模的推广应用。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一种心型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒； 

本发明的目的之二是提供一种制备所述心型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒的方法； 

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的： 

一种心型脂肪酸结合蛋白含量检测试剂盒，由彼此独立的试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成；所述的试剂Ⅰ的组分包括：生物缓冲剂、表面活性剂、促凝剂、防腐剂、稳定剂、阻断剂、螯合剂和水；试剂Ⅱ的组分包括：包被心型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒、生物缓冲剂、螯合剂、表面活性剂、防腐剂、助悬剂、封闭剂、稳定剂和水；其中，所述的包被心型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒粒径为90-200nm，优选为120-160nm，最优选为135nm。 

本发明通过大量的试验发现，包被心型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒的粒径大小对于检测的灵敏度以及线性范围等有着非常显著的影响。本发明通过大量的试验最终确定，当包被心型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒粒径为90-200nm，相比于其它粒径的胶乳颗粒，其检测的灵敏度及线性范围等特性有非常显著的改善或提升。由此，本发明试剂盒中的包被心型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒的粒径优选为90-200nm，其中,当包被心型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒的粒径为120-160nm时,检测的效果会进一步提升,当包被心型脂肪酸结合蛋白抗体的胶乳颗粒的粒径为135nm时，检测的灵敏度及线性范围的效果最好。