[发明专利]钠/钾离子比检测方法、系统和试剂盒

权利要求书

1.一种检测液体样品中钠/钾离子比的方法，所述方法包括以下步骤：

（1）用pH6.2～8.2的缓冲溶液和水溶性钠盐和钾盐配制钠/钾比不同的多个溶液样本，其中每个所述溶液样本中含有相同浓度的带有荧光标记基团的在钠、钾离子存在下能够分别形成不同G-四链体结构的DNA分子；

（2）将所述多个溶液样本置于荧光光谱仪下，采用410nm至540nm的激发波长，检测波长在第一、二波长处的荧光强度值，其中所述第一波长在480nm至550nm范围，所述第二波长在551nm至700nm范围；

（3）以所述溶液样本的钠/钾比作为横坐标或纵坐标，以步骤（2）中测得的第一波长处的荧光强度值与第二波长处的荧光强度值的比值为纵坐标或横坐标作图，从而获得钠/钾离子比的标准曲线；

（4）将待测液体样品中加入所述带有荧光标记基团的在钠、钾离子存在下能够分别形成不同G-四链体结构的DNA分子，并调节样品的pH值以使待测液体样品中的带有荧光标记基团的能够形成G-四链体的DNA分子的浓度以及pH值与步骤（1）中的溶液样本一致，从而得到测试溶液；

（5）将步骤（4）中获得的测试溶液置于荧光光谱仪下，采用与步骤（2）相同的激发波长，检测波长在所述第一、二波长处的荧光强度值；

（6）利用步骤（5）中测得的中测得的第一波长处的荧光强度值与第二波长处的荧光强度值的比值在步骤（3）中获得的钠/钾离子比标准曲线中找到对应的测试溶液的钠/钾离子浓度比。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述带有荧光标记基团的在钠、钾离子存在下能够分别形成不同G-四链体结构的DNA分子中含有下式I的结构：

GGYGGZGGMGG

式I

其中：式I中的X、Y、Z、和M、N分别代表一个或多个任意碱基；G代表鸟嘌呤碱基；所述荧光标记基团连接在所述DNA分子的两端，并且所述DNA分子两端的荧光标记基团不同；连接在所述DNA分子两端的荧光标记基团的组合选自以下荧光标记基团的组合：6-羧基荧光素和6-羧基四甲基罗丹明、异硫氰酸荧光素和罗丹明、Cy3和Cy5或者Alexa488和Cy3。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述带有荧光标记基团的在钠、钾离子存在下能够分别形成不同G-四链体结构的DNA分子中的碱基序列为TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、T GAGGGTGGGGAGGGT GGGGAA、AGGGAGGGC GC T GGGAGGAGGG、GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG、GGTTGGTGTGGTTGG、TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG、GGGCGCGGGAGGAAGGGGGCGGG或GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液；所述可溶性钠盐选自氯化钾、溴化钾、碘化钾、硫酸钾或硝酸钾；可溶性钾盐选自氯化钠、溴化钠、碘化钠、硫酸钠或硝酸钠。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述溶液样本中钠/钾离子比的范围优选在0至15的范围；所述带有荧光标记基团的在钠、钾离子存在下能够分别形成不同G-四链体结构的DNA分子在溶液样本中的浓度在0.5至30μmol/L的范围。

6.一种检测液体样品中钠/钾离子比的试剂盒和系统，所述试剂盒包括：pH6.2~8.2的缓冲液、可溶性钠盐、钾盐、带有荧光标记基团的在钠、钾离子存在下能够分别形成不同G-四链体结构的DNA分子；所述系统包括所述试剂盒和荧光光谱仪。

7.如权利要求6所述的试剂盒和系统，其中所述带有荧光标记基团的在钠、钾离子存在下能够分别形成不同G-四链体结构的DNA分子中含有下式I的结构：

GGYGGZGGMGG

式I

其中：Y、Z、M分别代表一个或多个任意碱基；G代表鸟嘌呤碱基；所述荧光标记基团连接在所述DNA分子的两端，并且所述DNA分子两端的荧光标记基团不同；连接在所述DNA分子两端的荧光标记基团的组合选自以下荧光标记基团的组合：6-羧基荧光素和6-羧基四甲基罗丹明、异硫氰酸荧光素和罗丹明、Cy3和Cy5或者Alexa488和Cy3。