[发明专利]一种超低分肝素钠工艺研究

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及从低效价肝素钠中将蛋白去除，得到超低分子肝素钠。 

背景技术

肝素钠是从猪小肠粘膜中提取的一种生化药品，是手术中不可替代的、挽救生命的、市场不能断档的首选药物。自二十世纪四十年代用于临床以来，其应用范围不断扩大，尤其是二十世纪九十年代以来，该产品临床主要用于防止血栓形成，治疗心血管病、血液病、尿毒症等。西方国家已开始研究肝素钠对癌症的防治作用，其新用途不断增加，而超低分子肝素钠是治疗血栓的主要药物，目前世界上还未上市，我公司进行了工艺攻关，已成功解决了治疗的目的，并在临床成功治疗了上百例。 

发明内容

本发明提供了一种超低分子肝素钠工艺研究的方法，是为了攻克国内外治疗血栓的疑难杂症，通过产品的逐级沉淀分离杂质而得到的。 

在发明的技术方案中，包括如下步骤： 

一、提取 

1、粗品溶解： 

开启水阀，加入一定量饮用水，再将肝素钠粗品(效价在10-20usp/mg)加入到反应罐中，边搅边加，按原料与饮用水1∶(6-7)比例溶解，搅拌5-10小时至全部溶解； 

2、酶解： 

将上一步溶解液，先用盐酸溶液调PH7.0-8.0，升温至50-55℃之间时加入胃蛋白酶5-10g/亿单位，再加入50g/亿单位胰酶，50-55℃保温4小时； 

3、急升温： 

将上一步酶解液在1小时内升温至85-90℃，静止10-30分钟，开搅拌，通入循环水降温，待温度降至50-55℃时，用2-6mol/L氢氧化钠溶液调PH10.0-12.0，静止分层20-30小时； 

4、底部沉淀的杂质离心： 

虹吸上清，用40-100目滤袋过滤，过滤后的溶液分为上清液和下层沉淀，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液； 

二、精制 

1、第一次沉淀： 

待上述上清液和离心液温度降至20-30℃，加入20-30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸将滤液调PH10.0-12.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到50％，沉淀15小时； 

2、第一次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积10％双氧水，氧化15小时； 

3、第二次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液调将溶液PH6.0-7.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到50％，沉淀15小时； 

4、第二次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积10％双氧水，氧化15小时； 

5、第三次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化钠，用盐酸溶液将溶液调PH10.0-12.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到45～50％，沉淀15小时； 

6、第三次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积10％双氧水，氧化15小时； 

7、第四次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液调将溶液PH6.0-7.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在 20℃时达到50％，沉淀15小时； 

8、第四次氧化：弃去上层乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积10双氧水，氧化15小时； 

9、溶液加入20-30g/L氯化钠，用盐酸溶液将溶液调PH10.0-12.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到50％，沉淀15小时； 

10、将沉淀物用纯化水按2-5L/亿单位溶解后，用孔径0.22-0.3微米滤膜板框机微滤，用乙醇沉淀，使乙醇浓度达75-80％，再加入23-26％的氯化钠溶液，每1升溶液加6-10ml氯化钠溶液，静止沉淀10-12小时； 

11、将上层乙醇弃去，加入无水乙醇脱水，边搅边加，使乙醇浓度为97-99％，静止24-30小时，弃去上层乙醇，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空泵通过管道和过滤瓶把剩余乙醇抽干，待干燥；