[发明专利]一种液相色谱法分离测定盐酸莫西沙星及其杂质的方法

说明书

技术领域

本发明属分析化学领域，具体涉及分离测定盐酸莫西沙星及其杂质的方法。

背景技术

盐酸莫西沙星为8-甲氧基氟喹诺酮类抗菌药物，分子式为C₂₁H₂₅ClFN₃O₄，其化学名为：1-环丙基-7-{（S，S）-2，8-重氮-二环[4.3.0]壬-8-基}-6-氟-8-甲氧-1，4-二氢-4-氧-3-喹啉羧酸盐酸盐，结构式如下：

盐酸莫西沙星由德国拜耳公司开发，1999年9月在德国首次上次，同年12月在美国上市。莫西沙星对革兰阳性菌，革兰阴性菌，厌氧菌，抗酸菌，和非典型微生物如支原体，衣原体和军团菌有广谱抗菌活性。

盐酸莫西沙星产品根据合成路线有可能存在以下的杂质A、B、C、D、E、F、a、b，这些杂质结构式分别如下所示：

英国药典2009版收载的盐酸莫西沙星质量标准中需对过个有关物质逐一进行控制，分析方法采用HPLC法，但参照其标准采用苯基键合硅胶柱进行测定，在分离峰定位对照品中的5个杂质时分离度不是特别好，而且杂质a和杂质b在该洗脱时间内未能洗脱出峰，该药典提供的方法如下：色谱条件与系统适用性试验：甲醇-（0.5g/L的四丁基硫酸氢铵溶液，1.0g/L磷酸二氢钾溶液和3.4g/L磷酸溶液）（72:28）为流动相，检测波长为293nm，柱温为45℃，流速为1.3ml/min；结果：在此条件下，杂质B、C无法分离，杂质a、杂质b在此流动相条件下，无法从色谱柱中洗脱。

《中国药科大学学报》【2012，43（1）:46-50】公开了一种使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的HPLC分析方法，该方法同样存在上述问题。

对于盐酸莫西沙星的上述8个杂质，在生产盐酸莫西沙星过程中需要进行质量控制。因此，实现盐酸莫西沙星与其杂质的分离测定对于盐酸莫西沙星质量控制方面具有现实意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种以反相色谱柱分离测定盐酸莫西沙星及其8个杂质的高效液相色谱方法，从而实现盐酸莫西沙星与其杂质的分离测定。

本发明提供的液相色谱法分离测定莫西沙星及其杂质的方法，其特征在于：以苯基键合硅胶为填料的色谱柱，以甲醇-缓冲溶液为流动相，采用梯度洗脱，其中甲醇-缓冲溶液起始体积比为30：70～10：90，优选为22：78，所述的缓冲溶液含有以下缓冲盐的组合：四丁基季铵盐、四丁基磷酸盐或四丁基硫酸盐与磷酸盐、磷酸的组合。

所述的缓冲溶液优选由四丁基硫酸氢铵、磷酸二氢钾和磷酸所制成，优选含有的缓冲盐的浓度为四丁基硫酸氢铵0.5g/L、磷酸二氢钾1.0g/L以及磷酸3.4g/L。

所述的梯度洗脱优选为：

所述的方法，优选在于包括以下步骤：

1）取盐酸莫西沙星或含盐酸莫西沙星的制剂适量，用每1000ml中含四丁基硫酸氢铵0.5g、磷酸二氢钾1.0g、磷酸2ml和无水亚硫酸钠0.05g的水溶液，溶解样品，并配制成每1ml中含盐酸莫西沙星0.2～5mg的样品溶液；

2）设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为210～350nm，色谱柱柱温箱温度为20～50℃，优选流动相的流速为1.0ml/min，色谱柱柱温箱温度为45℃，检测波长为293nm；

3）取1）的样品溶液2～50μl，注入高效液相色谱仪，进行梯度洗脱，完成莫西沙星及其杂质的分离测定。

所述的方法，色谱柱优选为选自牌号为Agilent Eclipse XDB-phenyl（优选.6mm×250mm，5μm）色谱柱。

该方法中，通过在样品溶液中含有无水亚硫酸钠，可以确保盐酸莫西沙星在水溶液中的稳定性。

本发明所述的分离测定方法，可按以下方法实现：

1）取盐酸莫西沙星或含盐酸莫西沙星的制剂适量，用每1000ml中含0.5g四丁基硫酸氢铵、1.0g磷酸二氢钾、2ml磷酸和0.05g无水亚硫酸钠的水溶液，溶解样品，并配制成每1ml中含盐酸莫西沙星0.2～5mg的样品溶液；

2）设置流动相的流速为0.5～1.5ml/min，流动相的流速优选为1.0ml/min；检测波长为200～350nm，最佳检测波长为293nm；色谱柱柱温箱温度为20～50℃，最佳柱温为45℃；

3)取1）的样品溶液2～50μl，注入高效液相色谱仪，完成莫西沙星性与其杂质的分离测定。

其中：