[发明专利]一种GM-CSF-HER2重组蛋白及其方法和应用无效
| 申请号: | 201210544431.5 | 申请日: | 2012-12-14 |
| 公开(公告)号: | CN102993312A | 公开(公告)日: | 2013-03-27 |
| 发明(设计)人: | 张超;叶永清;苏国新 | 申请(专利权)人: | 上海柯莱逊生物技术有限公司 |
| 主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C12N15/85;A61K39/00;A61P35/00 |
| 代理公司: | 上海三方专利事务所 31127 | 代理人: | 吴干权;钱品兴 |
| 地址: | 201201 上海市浦东新区张江*** | 国省代码: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 gm csf her2 重组 蛋白 及其 方法 应用 | ||
1.一种GM-CSF- HER2重组蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种制备权利要求1所述重组蛋白的方法,其特征在于该方法由以下步骤组成:
a.将GM-CSF的基因序列和HER2的基因序列通过酶切克隆到质粒pCEP4中构建重组质粒,
b.重组质粒转染人胚胎肾293细胞进行重组蛋白的表达,
c.纯化收集所述的重组蛋白。
3.如权利要求2所述的制备重组蛋白的方法,其特征在于所述的酶切为:在GM-CSF的基因序列两端添加酶切点位Hind III和Xho I,在HER2的基因序列两端添加酶切点位Xho I和BamH I。
4.如权利要求2所述的制备重组蛋白的方法,其特征在于通过Ni-NTA柱进行所述的分离纯化。
5.一种权利要求1所述重组蛋白用于肿瘤治疗药物的应用。
6.如权利要求5所述的重组蛋白用于治疗肿瘤药物的应用,其特征在于所述的肿瘤为乳腺癌。
7.一种权利要求1所述重组蛋白制备DC疫苗的方法,其特征在于用所述的重组蛋白刺激诱导健康C57BL/6小鼠经由骨髓制备的DC细胞,制得DC疫苗。
8.如权利要求7所述重组蛋白制备DC疫苗的方法,其特征在于用于刺激诱导的重组蛋白的浓度为25~100ug/ml。
9.如权利要求7所述重组蛋白制备DC疫苗的方法,其特征在于用于刺激诱导的重组蛋白的浓度为25~50ug/ml。
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