[发明专利]一种分离纯化虎杖中大黄素的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药材有效成份提取及纯化领域，具体涉及从中药虎杖中分离纯化获得高纯度大黄素的方法。 

背景技术

虎杖为蓼科植物虎杖的根茎和根。主要分布于华东、中南、西南及河北、陕西、甘肃等地。虎杖包含许多化学成分,如蒽醌类、二苯乙烯类、黄酮类等。其中，蒽醌类化合物是虎杖的重要活性成分，主要含有大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、大黄酚等。研究发现大黄素具有抗菌、泻下、保肝、抗肿瘤等作用。近来研究还发现以大黄素为主的总蒽醌提取物对中枢神经系统有一定影响，因而在临床上被广泛应用。目前对虎杖蒽醌类成分的提取纯化方法有较多报道，但实际操作中不易分离得到高纯度的药用成分，如何最大限度的保留其有效成分,除去无效成分,提高虎杖的药用附加值,已成为虎杖研究的重点。本专利提供的分离方法，是在大量的实验中总结出来的提取分离工艺，能获得纯度较高的有效成分。 

发明内容

本发明旨在提供一种分离纯化虎杖中大黄素的方法，该方法包括以下步骤： 

(1)将虎杖药材粉碎；

(2)用乙醇热回流提取，合并提取液，过滤，得粗提液

(3)将步骤(2)中粗提掖浓缩至大孔树脂上样浓度

(4)将(3)得到的浓缩液上大孔树脂柱；

(5)用水洗脱除杂后，用乙醇梯度洗脱；

(6)收集乙醇洗脱液减压浓缩真空干燥，得到大黄素粗品。

(7)将步骤(6)得到的粗品经过柱层析提纯，洗脱液浓缩，丙酮重结晶，得橙色针状结晶。 

其中步骤(1)中虎杖粉碎后的粒度为30-60目。 

步骤(2)中乙醇的浓度为40%-95%。 

步骤(3)中加水量为浸膏重量的8-10倍。 

步骤(4)中所述大孔树脂为D-101型大孔树脂，大孔树脂与步骤(1)中所述虎杖的重量比为0.5-5:1。 

步骤(5)中洗脱溶剂采用与蒸馏水除杂、95%乙醇洗脱，合并95%乙醇洗脱液。 

步骤(7)中层析柱所用硅胶为200－300目的粗孔硅胶，硅胶用量与大黄素粗品是比例为30：1。用氯仿和甲醇的混合试剂进行洗脱，薄层展开剂也用氯仿和甲醇混合试剂。 

所述氯仿和甲醇的混合试剂中，氯仿：甲醇为7：3时取得最佳分离效果。 

步骤(7)重结晶中所用试剂为丙酮。 

本发明方法简单，原料易得，产品纯度可达99%，产品得率高。 

具体实施方式

1.将烘干的虎杖用粉碎机粉碎，加入原料重量8倍的80%乙醇对原料回流提取3次，每次提取1h，滤过，合并滤液，将滤液减压浓缩回收乙醇，检测浓缩浓度至大孔树脂上样浓度，即大黄素的浓度为2.5mg/ml ； 

2.将浓缩液加入到大孔树脂中进行饱和吸附，最大上样量为1.5倍树脂床体积，先用4倍树脂床的水洗脱除去杂质，再用95%乙醇作为洗脱剂，洗脱剂用量为5倍树脂床体积，对洗脱剂进行回收溶剂和浓缩处理，干燥，得大黄素粗品；

3.大黄素粗品以氯仿溶解，与硅胶按1：1混合，另取200－300目的硅胶2kg，干法上柱，硅胶装柱的过程中不断用橡胶棒敲击柱体，尽量减少硅胶柱出现断层。再将大黄素粗品与硅胶混合物装入硅胶柱，然后用氯仿和甲醇（氯仿：甲醇＝7：3）进行洗脱，洗脱过程中不断点样进行检测。当含有大黄素的洗脱液从硅胶柱中流出时开始收集，直至洗脱液中不含有大黄素时停止收集，将收集的洗脱液蒸馏、干燥，反复用丙酮进行重结晶，得橙色针状结晶物。