[发明专利]抗小鼠EID1的单克隆抗体1G10.7和分泌该抗体的杂交瘤细胞系

说明书

技术领域

本发明涉及单克隆抗体领域，更具体地，本发明涉及抗小鼠EID1蛋白(EIA样分化抑制蛋白1)的单克隆抗体1G10.7，它是由小鼠杂交瘤细胞系1G10.7产生的。 

背景技术

P300，CBP及重要的抑癌基因Rb均在调控细胞周期及发育分化中发挥重要作用。这些分子生理上的重要意义体现在一旦对它们实施基因敲除，小鼠呈现胚胎致死的表型。同时它们的异常被报道导致鲁宾斯坦-泰比综合征等疾病。 

P300/CBP是体内重要的转录共活化因子和乙酰转移酶，对多种基因的转录调控，以及组蛋白等的乙酰化修饰发挥重要作用。特别是在一些重要的命运决定基因的启动子区，通过自身的组蛋白乙酰转移酶活性或招募其他的组蛋白乙酰转移酶，对转录激活发挥作用。在对ES细胞及HSC细胞自我更新及分化的调节中，p300都被报道参与其中发挥重要作用。 

EID1(EIA-like inhibitor of differentiation 1，EIA样分化抑制蛋白1)作为一类Rb结合蛋白被克隆出来，通过其上保守的LXCXE基序与Rb，p300及CBP结合。EID1通过抑制p300的组蛋白乙酰转移酶活性而抑制多种分化基因的表达。目前被认为是与p300结合的抑制因子。通过上述机制调控MyoD的转录，EID1已经显示出对肌肉分化调控的重要功能。同时EID 1还被报道可以与Necdin，SF-1等核受体结合并调控其表达水平。EID1在人与小鼠序列中有比较高的同源性。其在心肌，骨骼肌，睾丸及脑等组织已被检测到高表达。EID1及其对应的小RNA miR138均被报道在脂肪细胞分化中具有调控作用。故此目前EID1已经被定义为一种在分化发育过程中发挥重要作用的抑制基因。 

分化是发育生物学及细胞生物学研究的重要生理事件，分化的异常导 致胚胎的死亡或多种疾病的发生，目前在生物医学领域应用人来源或小鼠来源的细胞，并且更为重要的，应用小鼠胚胎或各类组织研究发育与细胞分化已经成为主要的研究手段。随着EID1基因研究的不断深入，提供灵敏特异的单克隆抗体用于相关领域的科学研究及未来针对这一靶点的病理检测具有重要意义。但目前关于EID1的商业化抗体种类很少，且大部分是多克隆抗体，发展对EID1具有较强识别能力并且能在生物医学研究中广泛应用，产量稳定的单克隆抗体细胞株十分必要。 

抗小鼠EID1蛋白的单克隆抗体1G10.7的用途包括：用于检测组织和细胞或其裂解液中EID1蛋白的含量。 

发明内容

本发明的一个目的是提供一种抗小鼠EID1蛋白(EIA-like inhibitor ofdifferentiation 1，EIA样分化抑制蛋白1)的单克隆抗体1G10.7。 

本发明提供了一种抗小鼠EID1蛋白的单克隆抗体1G10.7，其特征在于，它是由小鼠杂交瘤细胞系1G10.7产生的。以重组小鼠EID1蛋白(a.a.69-a.a.108)免疫Balb/C小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术制备的一株能稳定分泌特异性抗小鼠EID1蛋白单克隆抗体的细胞株1G10.7。1G10.7单抗与重组小鼠EID1蛋白及表达小鼠EID1蛋白的细胞(如胚胎干细胞)呈强阳性反应，而与其它不表达小鼠EID1蛋白的细胞(如分化类胚体细胞)无交叉反应。 

更具体地，本发明提供以下各项： 

1.一种抗小鼠EID1蛋白(EIA样分化抑制蛋白1)的单克隆抗体，其针对小鼠EID1蛋白的从氨基酸位置69至108的片段。 

2.根据以上1所述的单克隆抗体，其为1G10.7，它由小鼠杂交瘤细胞系1G10.7(CGMCC No.5828)产生。 

3.一种产生抗小鼠EID1蛋白单克隆抗体1G10.7的杂交瘤细胞，其特征在于，它是保藏号为CGMCC No.5828的小鼠杂交瘤细胞系1G10.7。 

4.一种检测组织或细胞或其裂解液中EID1蛋白的含量的EID1蛋白含量的方法，该方法包括：(1)将以上1所述的单克隆抗体1G10.7与待检测的分离的组织或细胞或其裂解液进行接触；和(2)判断是否有阳性 反应。 

5.根据以上4的方法，其中所述阳性反应是通过免疫荧光检测进行判断的。 

6.一种检测组织或细胞或其裂解液的EID1蛋白含量的试剂盒，其包含以上1所述的单克隆抗体1G10.7。 

7.一种检测组织或细胞或其裂解液的EID1蛋白含量的检测试剂，其包含以上1所述的单克隆抗体1G10.7。