[发明专利]枯草芽孢杆菌DS3在降解皂素废水有机污染物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis）DS3在降解皂素废水有机污染物中的应用。

背景技术

皂素（如薯蓣皂素）生产废水具有废水量小、色度大、有机物浓度高、酸度大、温度高等特点，可生化性差，是一种非常难处理的废水。

根据《皂素工业水污染物排放标准》（GB20425-2006）中具体规定，自2009年起COD排放量应低于300mg/L。目前皂素水解原液COD浓度达到20000-40000mg/L，综合废水COD浓度约为4000-12000mg/L。若直接排入水体，会导致水体的有机污染物浓度大幅度增加，由此引起江河湖泊严重污染，不仅直接影响了人们的生存环境，也造成了国民经济的巨大损失。

皂素废水中含有大量有机污染物，其中部分毒性醛、酮、酚类物质对污水处理系统里污泥中的微生物具有抑制作用，一般微生物不能正常生长。

同时，皂素废水中硫酸根浓度高，约为8000mg/L左右，在高盐度废水的生物处理系统中，由于盐度的变化往往会破坏微生物的细胞膜和菌体内的酶，致使污泥活性下降。同时，微生物对环境具有一定的适应能力，在一定盐度范围内微生物通过自身的渗透调节机制平衡细胞内的渗透压或保护细胞内的原生质，调节自身新陈代谢以适用盐度的变化。活性污泥在含盐环境中经过一段时间驯化后，将具有一定的耐盐性。

目前对皂素废水的处理多采用物理或化学的方法，现有技术中还没有微生物降解方法和用于降解皂素废水有机污染物的菌株的报导。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种枯草芽孢杆菌DS3在降解皂素废水有机污染物中的应用。

本发明为解决上述技术问题所采取的技术方案为：

枯草芽孢杆菌DS3在降解皂素废水有机污染物中的应用。

上述方案中，挑取活化后的枯草芽孢杆菌DS3单菌落，于LB液体培养基中培养过夜，按培养后的枯草芽孢杆菌DS3：皂素废水的体积比为0.5-2：100接种，30-35℃、pH值为6-8的条件下恒温培养，反应48-72小时。

上述方案中，所述枯草芽孢杆菌DS3保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2010146。

与现有技术相比，本发明取得的有益效果是：枯草芽孢杆菌DS3在高浓度硫酸根离子环境中具有较强的生长能力和良好的去除皂素废水中有机污染物的能力，该菌株能在72小时之内去除皂素废水中的COD 2150mg/L，去除效率达到50.71%。本发明为降解皂素废水高浓度有机污染物提供了有用的菌源，拓宽了对枯草芽孢杆菌功能方面的应用，具有较强的应用价值。

附图说明

图1为枯草芽孢杆菌DS3的PCR产物琼脂糖电泳图（左为Marker；右为扩增产物）。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的描述，当然下述实施例不应理解为对本发明的限制。

一、枯草芽孢杆菌DS3的筛选：

（一）、材料准备：

1、实验废水和池底污泥取自湖北省十堰市某黄姜皂素生产厂生产排放废水的生化处理系统。

2、培养基：

筛选培养基：3g/L牛肉膏，10g/L蛋白胨，5g/L氯化钠，20g/L琼脂，pH6.8。

富集培养基（g/L）：30g/L 磷酸氢二钾，100mg/L无水硫酸镁，10g/L磷酸二氢钾，10mg/L四水硫酸锰，5g/L硝酸铵，10mg/L七水硫酸亚铁，1g/L硫酸钠，5mg/L氯化钙，冰箱保存。使用时，稀释10倍，加入10%葡萄糖，pH值7.0～7.2。

LB液体培养基：蛋白胨 10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，氯化钠 10.0g/L，蒸馏水1000mL，pH7.0。

LB固体培养基：蛋白胨 10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，氯化钠10.0g/L，蒸馏水1000mL，琼脂15g/L（固）， pH7.0。

LB斜面培养基：蛋白胨 10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，氯化钠10.0g/L，蒸馏水1000mL，琼脂20g/L（固），pH7.0。

3、实验仪器和设备：

国华SHA-B恒温振荡器，

东器SPX生化培养箱，

立式压力蒸汽灭菌器，

光学显微镜-----Olympus有限公司，

pH计等----- sarporiusPD-10，

超净工作台，

PTC200型PCR仪，

电泳仪及电泳槽，