[发明专利]一种基因工程包涵体的洗涤方法有效
| 申请号： | 201210533053.0 | 申请日： | 2012-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN102977183A | 公开（公告）日： | 2013-03-20 |
| 发明（设计）人： | 赵志全;熊继元;柳常青 | 申请（专利权）人： | 鲁南新时代生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/34 | 分类号： | C07K1/34 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 273400 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因工程 包涵 洗涤 方法 | ||
1.一种基因工程包涵体的洗涤方法，其特征在于包括如下步骤：
a、膜平衡：取中空纤维膜，用纯化水润洗平衡，调整进水流速使过膜压力为5～15 bar，透过通量为10～30 LMH；
b、第一次洗涤：配制洗涤缓冲液Ⅰ，按5～15：1（V/W）加入包涵体，搅拌使成悬浮液，将包涵体悬液泵进所述中空纤维膜，使过膜压力为5～15 bar，透过通量为10～30 LMH，包涵体悬液被浓缩3～5倍后停止进液，收集包涵体浓缩液；所述洗涤缓冲液Ⅰ的组成为20～100 mM Tris-HCl，1～5% 曲拉通-X-100，pH9.0，或者组成为20～100 mM Tris-HCl，1～5% 吐温-20，pH9.0；
c、第二次洗涤：配制洗涤缓冲液Ⅱ，按5～15：1（V/W）加入步骤b处理后的包涵体浓缩液，搅拌使成悬浮液，将包涵体悬液泵进所述中空纤维膜，使过膜压力为5～15 bar，透过通量为10～30 LMH，包涵体悬液被浓缩3～5倍后停止进液，收集包涵体浓缩液；所述洗涤缓冲液Ⅱ的组成为20～100 mM Tris-HCl，2～4 M 尿素，pH9.0，或者组成为20～100 mM Tris-HCl，1～3 M 盐酸胍，pH9.0；
d、第三次洗涤：配制洗涤缓冲液Ⅲ，按5～15：1（V/W）加入步骤c处理后的包涵体浓缩液，搅拌使成悬浮液，将包涵体悬液泵进所述中空纤维膜，使过膜压力为5～15 bar，透过通量为10～30 LMH，包涵体悬液被浓缩3～5倍后停止进液，收集包涵体浓缩液；所述洗涤缓冲液Ⅲ的组成为20～100 mM Tris-HCl，pH9.0。
2.根据权利要求1所述基因工程包涵体的洗涤方法，其特征在于：所述中空纤维膜的材质为聚醚砜、再生纤维素、醋酸纤维素或亲水性聚偏氟乙烯。
3.根据权利要求1所述基因工程包涵体的洗涤方法，其特征在于：所述中空纤维膜的纤维管内径为0.75～1.75mm。
4.根据权利要求1所述基因工程包涵体的洗涤方法，其特征在于：所述中空纤维膜的滤膜孔径为750 k、0.1 μm、0.2 μm或0.45 μm。
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