[发明专利]春雷霉素残留快速检测试纸条

说明书

一、技术领域：本发明涉及一种检测抗菌素的器具，特别是涉及一种春雷霉素残留快速检测试纸条。 

 二、技术背景：

春雷霉素（kasugamycin）的分子式是C₁₄H₂₅N₃O₉ ,分子量为379.38，它是一种农、医两用的抗菌素，在农业上主要用于水稻稻瘟病、甜菜生尾孢、番茄叶霉病等的防治，在医学上主要用于防止绿脓杆菌的感染。由于其效果显著，在生产和生活上被广泛使用。虽然低剂量使用不会对人体和环境形成危害，但是由于人们使用不规范，已经对人类的健康构成潜在的危害。春雷霉素对土壤中的蔗糖酶、脲酶和过氧化氢酶的活性均有一定的影响，在施用春雷霉素时必须将用量控制在土壤本身能够接受的范围内，否则就会导致土壤生态系统被破坏，从而影响作物的正常生长，如果逐年施用，就会造成积累，使影响扩大。除此之外，春雷霉素由于极性大和易溶于水等特点，造成了其在土壤、河流中的污染，所以我们要严格控制其使用限量，制定相关法规和加大监控力度，并且要研制出灵敏、快速、高效的春雷霉素检测方法，减少其对身体和环境的危害。

目前对国内外春雷霉素的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、高效毛细管电泳法等，色谱法具有分离速度快、检测效率高、重现性好、灵敏度高等显著优点，但是前处理比较复杂、技术难度大、仪器昂贵、检测费用高而且需要专业的技术人员等不足，较适合于确证使用，难以应对大批量样品的检测，大大限制了其广泛应用，所以急切需要一种快速简便的春雷霉素检测方法。酶联免疫法（ELISA）是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，此法具有半定量和一定的定量能力，可以提供待测物的初步信息，但是免疫法在春雷霉素检测方面的应用还未见报导，所以研制出春雷霉素残留的快速检测方法是十分必要的。 

三、发明的内容：

本发明的目的：研制出敏感、特异、快速、简便的春雷霉素快速检测试纸条。

 本发明的技术方案： 

一种春雷霉素残留快速检测试纸条，含有底层为支撑层，中间层吸附层固定在支撑层上，外层保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为纤维层，吸附金标抗体纤维层，纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其中在纤维素膜层上有用偶联春雷霉素的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG溶液印制的直线式对照印迹，检测印迹和对照印迹平行组合排列为“||”。

测试端吸附纤维层用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯PVDF膜、或聚酯膜；金标抗体纤维层用吸附春雷霉素的金标抗体玻璃纤维棉，春雷霉素金标抗体为胶体金标记的春雷霉素单克隆抗体或多克隆抗体，偶联春雷霉素的载体蛋白溶液为春雷霉素与载体蛋白偶联的复合溶液；纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜。 

金标抗体纤维层用吸附春雷霉素的金标抗体玻璃棉，春雷霉素金标抗体为胶体金标记的春雷霉素单克隆抗体或多克隆抗体，偶联春雷霉素的载体蛋白溶液为春雷霉素载体蛋白偶联的复合溶液。 

在测试端吸附纤维层、金标抗体纤维层及吸水材料层上覆盖有保护膜，在测试端纤维层与金标抗体纤维层交界处对应的保护腆上印制有样品标记线，该标记线偏向测试端纤维层一侧约0.5cm处。 

偶联春雷霉素的载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)，或为鸡卵清白蛋白( OVA)，或为铁蛋白，或为血蓝蛋白。 

春雷霉素残留快速检测试纸条具有以下优点： 

(1)特异性强，敏感性高。春雷霉素残留快速检测试纸条以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标对单克隆抗体特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，快速检测试纸条具有较高的特异性和敏感性，可检测到0.l纳克的微量残留。

(2)操作简便快速。使用本发明试纸条时无需任何其它试剂，只要将其插入待检样品10秒左右，在2分钟内即可判定检测结果。 

(3)结果显示形象、直观、准确。本发明测试纸条以显示红棕色“|”及“||” （或“十”、或“┬”、或“┴”、或“├”、或“┤”）印迹作为检测的阳性和阴性标记，即在纤维素膜上显示一条棕红色“|”印迹表示在被检测样品液中含有春雷霉素，两条棕红色“||”印迹表示在被检样品中不含春雷霉素。结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。