[发明专利]人源胰岛素样生长因子结合蛋白1在毕氏酵母中的诱导表达及纯化方法、相关抗体制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白表达、纯化和抗体制备技术领域，特别涉及蛋白在毕氏酵母中的诱导表达、纯化和抗体制备技术领域，具体是指一种人源胰岛素样生长因子结合蛋白1在毕氏酵母中的诱导表达及纯化方法、相关抗体制备和应用。

背景技术

人源胰岛素样生长因子结合蛋白1（IGFBP1）是20世纪80年代发现的人体内重要的内分泌激素之一，它是由一组可溶蛋白组成，分为IGFBP1-6等六个成员，都能够和胰岛素样生长因子（IGF）以高亲和力结合，但不同的IGFBP与IGF结合后所产生的生物学作用各异。1988年人们第一次报道IGFBP1的全长cDNA，IGFBP1主要的生物学意义在于运输和调节胰岛素样生长因子1与受体的结合，并在解释许多生理、病理现象及癌症、糖尿病治疗方面有着重要意义（Ferry RJ Jr，Cohen P et al，Insulin-like growth factor binding proteins:new protein，new functions，1999，Horm Res，51(2):53-67）。由于在孕妇怀孕38周（预产期前）时，IGFBP1在羊水中和阴道分泌液中的浓度有显著差异（见下面2.3），因而成为检测胎儿羊水膜早破、早裂的重要指标之一。

IGFBP1共234个氨基酸，分子量约为25.3-31kD，定位于人染色体7p12-p14，主要由肝脏、子宫、蜕膜、肾脏、胎儿肝脏、卵巢等组织器官合成与分泌，并作用于分泌细胞自身及邻近的组织细胞或可通过血液循环作用于远处靶器官，主要功能除了运输和调节IGF-1与受体结合外，还能独立于IGF-1发挥作用。

1、IGFBP1与疾病的关系

1.1IGFBP1与癌症的关系

目前癌症是人类死亡的第二大因素，大量证据表明，不良的生活方式如吸烟、吃含高脂肪，高糖的食物及运动过少等是引起癌症的主要原因，会导致胰岛素抗性及高血糖症，同时增加血液中胰岛素的含量，引起胰岛素样生长因子1(IGF1)的增加，结果胰岛素样生长因子结合蛋白1（IGFBP1）的合成下降，刺激肿瘤细胞的生长，肿瘤细胞程序性死亡被抑制，增加了患癌症的风险，如在肺癌、前列腺癌、乳腺癌和结肠直肠癌等的发展过程中均出现以上情况，IGFBP1的表达调控参与了癌症的发生。据Jing Ma报道，通过比较分析，在高加索人中IGF1、IGFBP1和IGFBP3的遗传变异与患前列腺癌的几率存在相关性（R.James Barnard，Prevention of Cancer Through Lifestyle Changes.2004，Evid Based Complement Alternat Med.1(3):233-239；Fredrick R.Schumacher，Jing Ma，et al，A comprehensive analysis of common IGF1，IGFBP1 and IGFBP3 genetic variation with prospective IGF-1 and IGFBP-3 blood levels and prostate cancer risk among Caucasians，2010，Hum Mol Genet，19(15):3089-3101）。

1.2IGFBP1与Ⅱ型糖尿病和心血管疾病的关系

临床观察，Ⅱ型糖尿病人比非糖尿病人有更大的患心血管疾病的几率，更差的预后，几率增大的原因除了高血压和血脂异常外，还与胰岛素抗性有关，这是Ⅱ型糖尿病和新陈代谢综合征病人的典型特征，而这些特征都是由于体内胰岛素生长因子1和胰岛素样生长因子结合蛋白1的异常所引起的，大量实验表明，胰岛素生长因子1水平的下降增加患心血管疾病的风险，而胰岛素样生长因子结合蛋白1在调控胰岛素生长因子1与其受体的作用中发挥重要的作用，但有关胰岛素、胰岛素样生长因子及胰岛素样生长因子结合蛋白1之间的作用机制还不是非常清楚（Vivienne A.Ezzat，Mark T.Kearney et al，The role of IGF-1 and its binding proteins in the development of type 2 diabetes and cardiovascular disease，2007，Diabetes Obes Metab，10(3):198-211）。

2IGFBP1在妇产科领域中的临床应用

2.1预测早产