[发明专利]一种合欢皮有效单体的分离纯化制备技术及定量分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及以合欢皮为原料，通过实验得到了一种适用于分离合欢皮有效单体-(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷组分的HPLC色谱技术方法，并将该方法应用于此化合物的分离纯化、定量分析及相关产品的制备。 

背景技术

合欢皮为豆科植物合欢Albizia julibrissin Durazz.的干燥树皮，是中国药典一部收录的一味常用中药，具有解郁安神、活血消肿的作用，用于心神不安，忧郁失眠，跌扑伤痛[1、国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：134.]。前期实验研究已经发现，合欢皮的乙醇提取-正丁醇萃取相具有高效低毒的抑制血管新生的活性，并在进一步的实验中表明了该组分对HMEC-1细胞的IC₅₀为4.18μg/mL[2、刘玲燕，杜芳芳，冯磊，邱丽颖.合欢皮不同提取组分对HEMC细胞和3B11细胞的作用研究[J].时珍国医国药.2011，22(3)：762-764.]。关于合欢皮物质含量的测定，中国药典一部采用的是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C18液相色谱柱，以乙腈-0.04％磷酸溶液(18∶82)为流动相，以(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(以下简称合欢皮木脂素苷化合物)为对照品，计算合欢皮干燥品中此化合物的含量。而本专利采用Innovation^TM RTP Amide液相色谱柱，对合欢皮木脂素苷化合物进行分析与制备，不但解决了极性较大的合欢皮高效低毒组分在普通C18柱上分离困难的问题，而且此技术能够应用于从合欢皮中分离制备木脂素苷类化合物以及对合欢皮中的木脂素苷化合物进行定量分析等领域。 

Innovation^TM RTP Amide是酰胺极性嵌入式键合相，键合方法是用aminopropyl键合相和长链羧酸缩合反应形成一个酰胺。不同于普通C18键合相，这种键合相的选择性独特，一些在C18键合相上分离困难的物质，可以在极性嵌入式键合相上获得很好的解决。它是在类似C18链长度的硅烷试剂中嵌入极性酰胺，使得键合相亲水，在100％水相条件下稳定。因此可以选用此种类型的色谱柱，通过改变分离色谱条件，能够很好的将中药天然化合物中亲水性物质分开，从而可以为中药指纹图谱的建立以及单体化合物的分离纯化提供实验依据。 

因此，本技术研究先比较了Innovation^TM RTP Amide液相色谱柱(无锡科奥美萃生物科技有限公司)与WondaSil^TM C18液相色谱柱(戴安中国有限公司)分离合欢皮乙醇提取-正丁醇萃取相的能力，确定了一种适用于合欢皮木脂素苷化合物的分离纯化技术。 

发明内容

本发明的目的是使用液相色谱分离技术从合欢皮中分离得到合欢皮木脂素苷化合物，并将此技术应用于合欢皮木脂素苷化合物的定量分析与制备。 

本发明的技术方案： 

所述合欢皮乙醇提取-正丁醇萃取相的制备方法：取合欢皮，粉碎，加10倍量75％乙醇溶液，加热回流，冷却过滤，旋转蒸发至干，去离子水复溶，等体积水饱和正丁醇萃取至正丁醇相无色，合并正丁醇相，旋转蒸发至干，加水复溶，60℃真空干燥，得合欢皮乙醇提取-正丁醇萃取相样品。 

所述供试品溶液的制备方法：取上述所得样品，制备成浓度为1mg/mL的溶液，0.45μm微孔滤膜过滤， 备用。 

所述对照品溶液的制备方法：精密称取合欢皮木脂素苷化合物对照品适量，制备成浓度为1mg/mL的溶液，0.45μm微孔滤膜过滤，备用。 

所述色谱分离技术：选用WondaSil^TM C18液相柱与Innovation^TM RTP Amide液相柱，以乙腈-水为流动相，流速为1mL/min，进行梯度洗脱，并比较两者的分离效果。 

本发明的有益效果： 

本发明得到了一种分离合欢皮中木脂素苷化合物的HPLC法，并可将此方法用于合欢皮中木脂素苷化合物的定量分析、制备以及用来建立合欢皮药材的质量标准。 

附图说明