[发明专利]一种生物聚合物自动染色法及染色装置

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种生物聚合物自动染色法及染色装置。

背景技术

利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。在确定的条件下，带电粒子在单位电场强度作用下，单位时间内移动的距离（即迁移率）为常数。不同带电粒子因所带电荷不同，或虽所带电荷相同但荷质比不同，在同一电场中电泳，经一定时间后，由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。1937年瑞典学者A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了移动界面电泳仪，分离了马血清白蛋白的3种球蛋白，创建了电泳技术。本世纪40年代末到50年代初相继发展利用支持物进行的电泳，如滤纸电泳，醋酸纤维素膜电泳、琼脂电泳；50年代末又出现淀粉凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳等。目前，电泳技术已广泛应用于分析化学、生物化学、临床化学、药理学、免疫学、微生物学、遗传学等科学中。

生物聚合物如肽、蛋白质、核酸、寡糖、或者其混合物通过凝胶电泳分析，通常目的样品被装载在一个介质中，如聚丙烯酰胺凝胶，根据分子大小、电荷、和其他物理性质的差异，在电场中迁移得到不同的带，电泳后条带是通过生物聚合物与染色试剂结合后被检测。大量染色方法和试剂被开发出来用于染色出如凝胶这样的介质中的生物聚合物，这些试剂可以分为四种：第一种染色试剂包括结合到聚合物上的有机染料，如考马斯亮蓝染色试剂，使蛋白带变成蓝色从而可通过肉眼被观察到；第二种染色试剂包括结合到聚合物上的荧光染料，如EB结合DNA或RNA，当紫外线照射时，使DNA或RNA呈红色；第三种染色试剂包括银染试剂；第四种是染色背景的试剂，即被称为负染。第二种和第三种染色试剂的灵敏度已经达到或者超过第一种的传统染色试剂。但上述方法均存在着耗时较长的缺陷。

为了解决上述技术问题，申请人于2010年6月25日提交了申请号为201010220009.5，名称为生物聚合物快速染色法的中国发明专利申请，该方法包括染料与待染色的生物聚合物结合、未结合的染料与已结合染料的生物聚合物的分离、已结合染料的生物聚合物显像，该方法利用染料与生物聚合物在施加电场的介质中的迁移率不同，使染料快速与生物聚合物结合，并能快速使未结合的染料与已结合染料的生物聚合物分离，缩短整个染色时间，节约成本。但是该方法需要消耗载体，特别是一次性加厚滤纸，带来染色成本的增加。而且需要将电泳后的承载生物聚合体的介质与承载不同缓冲液的滤纸组成三明治结构，需要人为操作，不够简便，也需要接触介质、染料等，安全性较低。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述缺陷，提供一种生物聚合物自动染色法。

本发明的另一目的是提供应用于本发明生物聚合物自动染色法的一种优选染色装置。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种生物聚合物自动染色法，包括如下步骤：

a、染料与待染色的生物聚合物结合：将染料与待染色的生物聚合物在施加电场的介质中保持接触，使染料与待染色的生物聚合物结合而进行染色；

b、未结合的染料与已结合染料的生物聚合物的分离是先将多余染料移除，加入脱色液，脱色液与残留染料以及已染生物聚合物置于施加电场的介质中，使未与生物聚合物结合的染料从介质中完全移出或部分移出而生物聚合物留在介质中；

c.已结合染料的生物聚合物显像：保留在介质中的已结合染料的生物聚合物采用可见光下显像或采用非可见光成像技术显像；

其中，步骤a与步骤b中的介质为同一介质。

所述的未结合的染料与已结合染料的生物聚合物的分离结束后将脱色液移除。

步骤a与步骤b在同一容器中进行。

所述的容器底部分别设有泵与染料和脱色液储藏容器相连接，染料的加入、移除、脱色液的加入及移除通过泵完成。

染料与生物聚合物上的染料在介质中的迁移方向相同或不相同。当迁移方向相同时，结合在生物聚合物上的染料与未结合在生物聚合物上的染料（即游离染料或残留染料）的迁移速率不同，未结合在生物聚合物上的染料迁移速度快，因此在迁移方向相同的情况下也可以实现染色。

当存在多个生物聚合物时，步骤b中施加的电场使生物聚合物在介质中迁移的方向与步骤a中施加的电场使生物聚合物在介质中迁移的方向不相反。