[发明专利]应用抗除草剂突变性状提高杂交油菜种植纯度的方法

权利要求书

1.一种应用抗除草剂突变性状提高杂交油菜种植纯度的方法，包括步骤：

A、抗性性状转育：以抗咪唑啉酮天然突变材料为父本，细胞质雄性不育恢复系为母本，配制杂交组合；对杂交F₁代进行小孢子苗培养，获得DH群体；苗期喷施咪唑啉酮类除草剂咪唑乙烟酸，有效剂量为90ga.i./hm²，筛选抗性植株，将抗咪唑啉酮性状转育到细胞质雄性不育恢复系中，获得转育的具有抗咪唑啉酮性状的后代株系；

B、抗性组合选配：以细胞质雄性不育系为母本，对转育的具有抗咪唑啉酮性状的后代株系进行测交，选配恢复率达到100%且具有抗性性状的恢复系；以细胞质雄性不育系为母本配制生产杂交种，获得具有咪唑啉酮抗性的杂种F₁；

C、提高种植纯度：种植抗性杂种F₁；对抗性杂交种F₁苗期喷施有效剂量为90ga.i./hm² 的咪唑乙烟酸除草剂，将不具有抗性的不育系微量花粉自交株、外来花粉污染株及各种机械混杂植株等假杂种一次性杀死去除，达到提高种植纯度的目的。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于： 

1）以抗咪唑啉酮类除草剂天然突变体M9为父本，细胞质雄性不育双低恢复系N340为母本，配制杂交组合，当年秋播种植N340×M9组合，油菜苗期喷施咪唑啉酮类除草剂咪唑乙烟酸，有效剂量为90ga.i./hm², 去除假杂种和田间自生苗，取抗性植株花蕾进行小孢子苗培养；小孢子培养于每日上午摘取刚开放朵花的花序置于4℃恒温冰箱24h，次日挑选长度为4.5mm左右的花蕾用70％酒精浸泡30s，1％升汞表面消毒10min，无菌水冲洗3次，每次冲洗2min；

将消毒花蕾置于无菌玻璃管中，加B₅提取液1ml，用玻璃棒沿管壁将花蕾捣碎挤出小孢子，经400目滤膜过滤，1000rpm/min离心5min，去除上清液后再加入B₅提取液悬浮小孢子，复重1次，去除上清液，加入NLN-13(13％蔗糖)培养液转入三角瓶中；

32℃热激培养24h，25℃黑暗静止培养,直至出现可见的小白点胚状体时，转至25℃恒温摇床50r/min振荡培养，待胚状体长度达5mm时转到B₅固体培养基上，25℃光照培养，每天光照时间16小时，直至成苗；

当年秋季将单倍体小孢子苗用2%秋水仙碱溶液浸泡根部30min后栽入盆钵，活棵后长至5-6叶期移栽到大田，菜苗成活后用有效剂量为90ga.i./hm² 的咪唑乙烟酸进行除草剂抗性筛选，获得具有除草剂抗性的DH株系群体；

2）将具有除草剂抗性的DH株系与细胞质雄性不育系宁A7进行测交配组，当年秋播种植测交组合，选配恢复率达到100%且具有抗性性状的恢复系； 

3）用上述抗性恢复系与不育系宁A7生产抗性杂交种F₁；

4）F₁杂种苗期喷施一次90ga.i./hm² 的咪唑乙烟酸除草剂，提高杂种F₁种植纯度。