[发明专利]一种石花菜的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种石花菜的繁育方法，特别地涉及一种石花菜的组织培养方法。

背景技术

石花菜属于多年生藻类。藻体直立，多分枝，下部有假根状固着器附在浅海海底的岩石上，一般高20～30厘米，紫红色或深红色。藻体由表皮细胞、表层和髓构成，表皮细胞排列紧密，皮层和髓比较疏松，细胞里面充满胶质。石菜花雌雄异株，藻体有雌配子体和雄配子体以及四孢子体，主要是有性繁殖，繁殖过程比较复杂。石花菜的藻体含有大量半乳糖胶的多糖类化合物，是制造琼胶（俗称洋菜）的主要原料。

由于石花菜的繁殖方式以有性繁殖为主，因此导致人工在野外养殖石花菜时繁育技术复杂且耗时耗力。石花菜的组织培养工作已经起步有一段时间了，但是主要还是处于对组培流程技术上的开发和创新，例如中国专利申请号为200910231251X的专利申请就公开了一种石花菜组织培养苗种培育方法。该专利文献中使用的是常见的海藻培养基PES加富培养基，使用这种培养基要培养出成熟的石花菜需要30～40天，时间相对较长。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种石花菜的组织培养方法，该方法包括以下步骤：

（1）原材料的准备及消毒

取生长情况良好的石花菜主枝或分枝作为原材料，对其进行处理，清洗时使用超声波清洗仪对石花菜表面进行清洗，然后用清水冲净，随后将石花菜切成2～3mm大小的块状并将其浸泡入0.1%的升汞溶液中2～3分钟，随即用无菌水浸泡3～5次，每次浸泡10分钟；

（2）成苗培养基的配制及接种

成苗培养基的配方如下：NaCl 25～30g/L，MgSO₄.7H₂O 8～10g/L，EDTA-Fe 20～25mg/L，K₂HPO₄ 70～80mg/L，H₃BO₃ 20～30mg/L，MnCl₂ 15～20mg/L，ZnCl₂ 10～12mg/L，Co(NO₃)₂.6H₂O 1～1.5mg/L，玉米素1.5～2.0mg/L，5-氨基乙酰丙酸0.5～1.0mg/L，琼脂10g/L；

将步骤（1）中所获得的石花菜小块接种至成苗培养基上，每个培养皿中接种2～3块石花菜小块；

（3）成苗培养

将接种完成的愈伤组织培养基放置在恒温培养箱中，培养箱的温度保持在20摄氏度，光照强度为1000～1100lx，每天光照时间为14小时；6～8天时间石花菜小块长成幼苗形态；

（4）成体培养基的配制及接种

成体培养基的配方如下：NaCl 25～30g/L，MgSO₄.7H₂O 8～10g/L，K₂SO₄500～600mg/L，CaCl₂.2H₂O 300～350mg/L，K₂HPO₄ 200～250mg/L，KI 0.5～0.55mg/L，H₃BO₃ 9～10mg/L，MnSO₄.4H₂O 20～25mg/L，ZnSO₄.7H₂O 5～6mg/L，CuSO₄.5H₂O 0.02～0.03mg/L，CoCl ₂.6H₂O 0.1～0.15mg/L；

肌醇10～15mg/L，烟酸0.3mg/L，维生素B₆ 0.2～0.3mg/L，维生素B₁ 0.2～0.3mg/L；

步骤（3）中获得的幼苗接入成体培养基中，接入的密度为每200ml培养液接种1株幼苗；

（5）成体培养

将接种完成的成体培养基放置在恒温培养箱中，培养箱的温度保持在25摄氏度，光照强度为2000～2200lx，每天光照时间为14小时，培养过程中每天向培养液中充入清洁无菌空气1次，17～22天可获得成体石花菜，石花菜的长度可达15～20厘米。