[发明专利]双峰驼内收蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法

权利要求书

1.一种双峰驼内收蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。

2.根据权利要求1所述的双峰驼内收蛋白基因，其特征在于该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1中108-1412位的序列。

3.一种含有权利要求1或2所述的双峰驼内收蛋白基因的重组蛋白。

4.根据权利要求3所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的氨基酸序列具有SEQ ID NO.2所示的序列。

5.根据权利要求3所述的重组蛋白，其特征在于该重组蛋白为具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。

6.根据权利要求3或4所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼内收蛋白中得到双峰驼内收蛋白基因，该引物对的核苷酸序列信息如下：

正引物，SEQ ID NO.3（正向）：5’- ATGAATGGTGATACTCGGGCG -3’，

反引物，SEQ ID NO.4（反向）：Oligo dT。

7.根据权利要求5所述的重组蛋白，其特征在于通过设计一对引物从双峰驼内收蛋白中得到双峰驼内收蛋白基因，该引物对的核苷酸序列信息如下：

正引物，SEQ ID NO.3（正向）：5’- ATGAATGGTGATACTCGGGCG -3’，

反引物，SEQ ID NO.4（反向）：Oligo dT。

8.一种根据权利要求1或2所述的双峰驼内收蛋白基因的克隆方法，其特征在于按下述步骤进行：

第一步，总RNA提取，采取双峰驼组织样品后，对组织样品进行组织总RNA提取；

第二步，引物设计及合成，引物对的核苷酸序列信息如下：

正引物，SEQ ID NO.3（正向）：5’- ATGAATGGTGATACTCGGGCG -3’，

反引物，SEQ ID NO.4（反向）：Oligo dT；

第三步，RT-PCR扩增，利用反转录试剂盒对组织样品中的蛋白基因进行反转录，并对待扩增的DNA片段进行RT-PCR扩增；

第四步，蛋白基因的克隆，首先对PCR扩增的DNA片段进行回收，然后将回收的DNA片段同T载体连接形成感受态细胞，将感受态细胞进行转化培养成单菌落，取少量该单菌落进行PCR扩增，对扩增后的单菌落鉴别T载体上是否含有目的DNA片段，若有目的DNA片段，将单菌落放入培养基中进行过夜培养，最后对质粒进行回收。