[发明专利]针对磷脂酰肌醇蛋白多糖-3和T细胞抗原的双特异性抗体

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤相关抗体，更具体的，基因工程抗体领域。

背景技术

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(Glypican-3，GPC3，又称DGSX，GTR2-2，MXR7，OCI-5，SDYS，SGB，SGBS或SGBS1)是一种细胞表面蛋白，属于硫酸乙酰肝素蛋白多糖家族。GPC3基因编码产生70-kDa左右的前体核心蛋白，该前体蛋白能够被弗林蛋白酶(furin)剪切产生40-kDa左右能够分泌进入血液的可溶性氨基端肽，和30-kDa左右含有2个硫酸乙酰肝素(HS)糖链的膜结合的羧基端肽。GPC3蛋白通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚依附在细胞膜上。

GPC3高度表达于胎儿肝脏，而不表达于正常成年人的肝组织。但在肝细胞肝癌中恢复表达，与肝癌的发生发展有十分密切的关系，不仅在肝癌发生的早期检出率较高，而且随着肝癌的发展，其检出率也随之增高。而在肝腺癌，胆管细胞癌，肝转移癌和12种常见实体瘤和21种非肝癌细胞系中均未检测出GPC3的表达。此外，GPC3也在例如黑色素瘤，卵巢透明细胞癌、卵黄囊瘤、神经母细胞瘤等肿瘤中表达。考虑到GPC3在肝细胞肝癌，黑色素瘤等肿瘤中的高表达，GPC3被认为是肿瘤免疫治疗的一个候选靶标。

利用抗GPC3抗体进行肝癌检测和利用抗GPC3抗体的抗体依赖的(ADCC)或补体依赖的(CDC)细胞毒性的研究已有报道，例如CN101186650A(中外制药株式会社)，发明名称为“抗存在于血液中的GPC3的分泌性N-端肽或C-端肽的抗体”；CN102180969A(中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所)，发明名称为“抗肝癌活性单克隆抗体及其应用”，其涉及用GPC3氨基端359-580位氨基酸残基为抗原制备的抗GPC3单克隆抗体；CN101633693A(中国人民解放军第二军医大学)，其涉及针对GPC3的氨基端抗原的单克隆抗体；CN101052878A(株式会社英仙蛋白质科学)，其涉及以使用识别GPC3的N端部位的抗体测定GPC3为特征的监控肝炎重症化的方法；CN1842540A(中外制药株式会社)，其涉及一种据称与传统抗体相比具有较高ADCC活性和CDC活性的抗GPC3单克隆抗体。

此外，表1总结了另外一些自2003年来报道的针对GPC3的单克隆抗体(mAbs)。其中，一种针对GPC3的治疗性mAb最近被报道(Advances in LiverCancer Antibody Therapies：A Focus on Glypican-3 and Mesothelin，BioDrugs.2011 October 1；25(5)：275-284.)，其针对GPC3位于C端524-563位氨基酸残基形成的抗原决定簇。根据该报道单克隆抗体GC33(IgG2a，κ)诱导抗体依赖细胞毒作用(ADCC)并表现出抑制小鼠皮下移植HepG2和HuH-7异种移植物的肿瘤生长，其抗肿瘤作用主要源于自然杀伤细胞。

表1.已知的一些抗GPC3单克隆抗体

然而，仍然有强烈的需要继续探索特异性针对GPC3的治疗性抗体以用于肝癌，黑色素瘤，卵巢透明细胞癌、卵黄囊瘤、神经母细胞瘤等肿瘤的治疗。令人期待的是，这些治疗性抗体需要具有改善的特异性，肿瘤细胞杀伤毒性，HAMA问题，肿瘤杀伤所需的最小剂量等优点。

双特异性抗体(BsAb)技术常被用于改善针对肿瘤的治疗性抗体的功效：将肿瘤相关抗原特异的抗体与具杀伤肿瘤细胞功能的效应细胞的表面触发分子特异的抗体偶联构成的双特异性抗体，可高效地将体内的免疫效应细胞富集于肿瘤细胞周围，激活免疫效应细胞特异性地杀伤肿瘤细胞，从而起到治疗肿瘤的目的。目前双特异性抗体的制备有化学偶联法，杂交瘤法和基因工程法三种。

化学偶联法是先采用还原剂，使不同的两种单克隆抗体或其片段解链，获得单价抗体或抗体片段，再采用异双功能交联剂把两种具有不同抗原特异性的单价抗体或其片段交联在一起。该方法可快速，大量制备BsAb，但是在交联过程中抗体时有失活，而且难于保证产物的均质性。