[发明专利]双峰驼溶菌酶蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，是一种双峰驼溶菌酶蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法。

背景技术

溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一种特异性地作用于细菌细胞壁的水解酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

人们主要以鲜奶的形式饮用驼乳，并在长期的生活实践中发现驼乳具有更长的保存期。这一点引起了广大学者的兴趣，诱发人们去研究驼乳中的保护性蛋白。同时，将驼乳用来治疗某些感染性疾病的事实也暗示了它所含有的抗微生物成分。Elagamy等报道，驼乳除了拥有与牛奶相似的各种营养物质外，还有很高的生物学价值，即驼乳中含有大量的诸如溶菌酶，乳铁蛋白和免疫球蛋白等保护性蛋白。

溶菌酶不仅能裂解细菌的细胞壁，而且还能增强抗体活性，因此溶菌酶是一种具有杀菌作用的乳蛋白。Elagamy等报道驼乳中的溶菌酶含量是牛奶的4.9倍，是水牛乳中的11倍。Barbour等研究了驼乳的抗菌作用与其溶菌酶含量的关系。在200份乳样中发现有20个抑制了六种病原菌中的一个或多个病原菌的生长。并且这20个具有抗菌作用的样品中溶菌酶含量达648μg/100mL，明显高于无抗菌作用的乳样溶菌酶含量（62.6μg/100mL）。人乳的溶菌酶含量为40000μg/100mL、牛乳为120μg/100mL。

Elagamy（2000）报道，驼乳中除了拥有与牛奶相似的各种营养物质外，溶菌酶、乳铁蛋白和免疫球蛋白等保护性蛋白含量均高于牛乳。El-Sayed 等(1992)的研究结果发现驼乳中的溶菌酶可抑制鼠伤寒沙门氏菌的生长发育，而且与卵清蛋白有相同的抗菌谱，但与牛奶中的溶菌酶的抗菌谱不一样。

Duhaiman等报道，与G-菌（埃希氏菌属）相比，G+菌（微球菌属）对驼乳溶菌酶更为敏感。El Sayed等研究发现驼乳溶菌酶可抑制鼠伤寒沙门氏菌的生长发育，而且与卵清蛋白有相同的抗菌谱，但与牛奶的溶菌酶的抗菌谱不一样。

双峰驼驼乳中的溶菌酶含量明显高于牛乳和水牛乳，且可以有效的抑制病原菌的生长，但是目前国内外对驼乳中溶菌酶的研究甚少。

发明内容

本发明提供了一种双峰驼溶菌酶蛋白基因，该基因是一种具有抗菌、消炎、抗病毒并可以增强抗体活性密切相关的基因。

本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种双峰驼溶菌酶蛋白基因，该基因是一种具有抗菌、消炎、抗病毒并可以增强抗体活性密切相关的基因，具有SEQ ID NO.1中从核苷酸第27-481位的核苷酸序列。

本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种双峰驼溶菌酶蛋白基因的重组蛋白。

下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：

上述重组蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

上述重组蛋白为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

上述重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

上述重组蛋白通过设计一对引物从双峰驼溶菌酶蛋白中得到双峰驼溶菌酶蛋白基因，该引物对的核苷酸序列正向引物为SEQ ID NO.3和反向引物为SEQ ID NO.4，其序列信息如下：

SEQ ID NO.3：5’- ATGAAGGCTCTCCTTGTGCTGG -3’,

SEQ ID NO.4：5’-GCCCCAGCACAAGGAGAGCCT -3’。