[发明专利]一种川芎种质的离体保存方法及川芎离体保存培养基

说明书

发明内容

本发明属于栽培领域，涉及一种川芎种质的离体保存方法及川芎离体保存培养基。 

背景技术

川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的根茎，为我国的传统中药，也是著名的川产道地药材，具有近两千年的栽培和使用历史。历代医家均作为治头痛、活血行气、祛风止痛药使用。2005版《中国药典》一部中收载的成方制剂和单味制剂共564种，其中使用川芎的有85种，约占药典收载中成药的15%。在2010年版《中国药典》收载的1039个成方制剂和单味制剂中，含川芎的有155个，占所载成方制剂总数的14.92%。两版药典使用川芎的收载处方增加了82.35%，说明川芎使用量和需求量在不断提高。现代临床上主要用于治疗心脑血管系统的疾病，效果显著，如“速效救心丸”等。川芎除供药用外，还用于保健品、美容化妆品、饲料添加剂、烟用香料添加剂及天然防腐剂等，国内外市场需求量大。 

川芎是无性繁殖，生产上用膨大的地上茎节（苓种或芎苓子）作为繁殖材料。长期以来，川芎种植基本处于自发状态，苓种繁育仍然停留在自繁自用，缺乏统一的生产技术规程和科学的组织管理，且没有苓种分级标准和检验规程，导致川芎苓种质量良莠不齐，使产区川芎药材的产量和质量受到极大影响。经过上千年的栽种，加上缺乏选种育种，存在一定程度的种质退化。 

蒋桂华等，“川芎种质资源的调查收集与保存研究”，中草药，2008年4月第39卷第4期与高农等，“川芎苓子繁育技术”，药用植物·特种经济动植物2004年第10期均报道了的川芎种质的保存方法，但均为传统的田间保存方法，存在耗费人力物力，容易损失，成本高，保存效果不佳等缺点。 

发明内容 

为了克服上述缺陷，本发明提供了一种川芎种质的离体保存方法其离体保存培养基。 

本发明川芎种质的离体保存方法，它包括如下步骤： 

（1）取川芎茎尖，消毒灭菌； 

（2）将步骤（1）处理后的川芎茎尖接种于川芎离体保存培养基中保存，保存条件为：温度4~25℃，光照强度600~1500lx，光照时间10~14h/d；所述 保存培养基以1/2MS培养基为基础培养基，添加20~30g/L蔗糖，或者以MS培养基为基础培养基，添加20~60g/L蔗糖。 

其中，所述步骤（1）包括如下步骤： 

1）消毒：取川芎茎尖，用消毒粉消毒其表面； 

2）灭菌：取步骤1）处理后的川芎茎尖，用70%乙醇灭菌30s，再用HgCl₂灭菌2~5min，或者先用70%乙醇灭菌15s，再用HgCl₂灭菌5min。 

其中，步骤（2）所述保存培养基以1/2MS培养基为基础培养基，添加20g/L蔗糖，或者以MS培养基为基础培养基，添加40g/L蔗糖。 

其中，步骤（2）所述保存培养基中含有植物生长抑制剂。 

植物生长抑制剂：是抑制或破坏植物顶端分生组织的分裂与膨大的一类化学物质，它能延缓细胞分裂和伸长，达到控制部分生长、刺激花芽分化、延缓衰老等目的。 

所述植物生长抑制剂为多效唑、矮壮素、烯效唑或者青鲜素。 

优选地，所述多效唑的浓度不低于0.5mg/L；所述矮壮素的浓度为0~40mg/L。进一步优选地，所述多效唑的浓度为0.5mg/L；所述矮壮素的浓度为40mg/L。 

其中，步骤（2）所述保存条件为：温度为25℃，光照强度为800lx，光照时间为12h/d。 

本发明川芎离体保存培养基，它以1/2MS培养基为基础培养基，添加20~30g/L蔗糖，或者以MS培养基为基础培养基，添加20~60g/L蔗糖。 

其中，所述保存培养基以1/2MS培养基为基础培养基，添加20g/L蔗糖，或者以MS培养基为基础培养基，添加40g/L蔗糖。 

其中，所述保存培养基中还添加有植物生长抑制剂。所述植物生长抑制剂为多效唑、矮壮素、烯效唑或者青鲜素。 

优选地，所述多效唑的浓度不低于0.5mg/L；所述矮壮素的浓度为0~40mg/L。进一步优选地，所述多效唑的浓度为0.5mg/L；所述矮壮素的浓度为40mg/L。 

本发明保存方法实现了离体保存川芎种质，操作方便，成本低廉，可以保证川芎的遗传稳定性，从而保留优质的川芎资源，具有良好的市场应用前景。 

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。