[发明专利]一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺

说明书

技术领域

本发明涉及兽用医药生物领域，特别涉及一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺。 

背景技术

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性、致死性的猪传染病，在世界上很多国家和地区均有发生，是养猪业的一种毁灭性传染病，给畜牧业生产带来了严重的经济损失。世界动物卫生组织将猪瘟列为法定通报性疫病，我国将其划为一类动物传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗（C株），该疫苗毒株系猪瘟石门系强毒通过兔子体内传代400多代而筛选出来。C株是一株非常安全的弱毒疫苗，对各种年龄和品种的猪都没有副作用，并且有良好的免疫效力，它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答，对不同基因型的猪瘟病毒株均能提供有效的免疫保护。免疫母猪通过母乳可对仔猪提供被动免疫保护，但过高水平的母源抗体会影响仔猪对C株疫苗的主动免疫应答。随后创制了不同的疫苗制造工艺，如猪瘟家兔脾淋组织疫苗、乳兔组织苗、牛体反应组织苗和细胞培养苗等。 

由于家兔脾淋组织疫苗保持了C株的安全性、免疫原性和遗传稳定性的优点备受广大养猪户的青睐。但由于其成本高、产量低，受到外界影响因素多。所以在上个世纪主要用于其它猪瘟疫苗生产工艺的种毒制备，对脾淋组织疫苗的产业化生产工艺研究相对比较少。目前的生产工艺还是停留在19世纪60代时的生产工艺。这种生产工艺主要存在以下两方面的问题：1)半成品保存的时间短，在-15℃时，保存期不超过15天并且病毒效价的损耗大，特别是夏季大兔存栏量少，长途运输热应激大，影响产品品质，生产困难；2)目前的产品效价只能达到150个兔体感染量。临床使用往往加大头份，造成副反应大。 

发明内容

本发明的目的在于通过接种时采用猪瘟病毒专用保护剂来稀释种毒，种毒进入兔体能够快速在靶细胞定植和扩繁，提高毒价；通过用专用的脾淋组织保护剂来降低猪瘟病毒的损耗，延长半成品的保存期，从而提高产品的效价和品质，提供一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺。 

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 

一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺，其包括以下步骤： 

1)选兔：选用体重1.5-3.0kg的健康家兔，接种前测温观察3天以上，需体温正常； 

2)生产毒种繁殖： 

a.接种：将猪瘟兔化弱毒冻干毒种用猪瘟病毒专用保护剂制成20-50倍稀释的乳剂，每 兔耳静脉注射0.5-2mL； 

b.测温：兔接种24h后，每隔6-8h测体温一次； 

c.生产毒种收获：选择定型热反应兔，体温下降开始24h内剖杀，以无菌操作采取脾脏，-15℃冷冻保存脾脏作为生产毒种； 

d.生产毒种鉴定：按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行鉴定； 

3)猪瘟活疫苗的制备： 

a.接种：将生产毒种用猪瘟病毒专用保护剂制成20-50倍稀释的乳剂，每兔耳静脉注射1mL； 

b.测温：操作同步骤2)中的b； 

c.半成品收获：选择定型热或轻型热反应兔，体温下降开始24h内剖杀，以无菌操作采取脾脏和淋巴，即得半成品； 

d.半成品保存：在半成品中按每千克加入200-300mL脾淋组织专用保护剂后，于-15℃以下冷冻保存；保存时间不超过60天； 

4)配苗、分装及冻干：在无菌操作下，将半成品称重、剪碎后，加入5%蔗糖牛奶保护剂，于同一容器内混合研磨，过滤除去残渣，加入稳定剂和抗生素，充分搅匀，置2-8℃处理2-3h后，定量分装；每头份含脾脏和淋巴组织毒不少于0.01g，分装后迅速进行冷冻真空干燥后即得成品。 

5）成品检测：按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。 

进一步，所述的猪瘟病毒专用保护剂为：甘氨酸2.5-4%，精氨酸0.5-1.25%，谷氨酸1.25-2.5%，其余为水。 

进一步，所述的脾淋组织专用保护剂为：蔗糖5-10%，蛋白胨5-6%，硫脲4%，明胶0.5-0.8%，谷氨酸2.5-5%，其余为水。 

本发明采用以上技术方案，通过接种时采用猪瘟病毒专用保护剂来稀释种毒，种毒进入兔体能够快速在靶细胞定植和扩繁，提高毒价；通过用专用的脾淋组织保护剂来降低猪瘟病毒的损耗，延长半成品的保存期，从而提高产品的效价和品质，使半成品的保存期从原来的15天，延长到了60天，成品的效价从原来的150个兔体感染量提高到900个兔体感染量。 

具体实施方式

本发明的技术方案为： 

一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺，其包括以下步骤：