[发明专利]柑橘生物类黄酮中橙皮甙含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物测试领域，尤其涉及柑橘生物类黄酮中橙皮甙的测定方法。

背景技术

柑橘类黄酮是从柑橘果实中提取出来的一系列具有显著生物活性的黄酮类化合物，柑橘类黄酮具有独特的芳香性、良好的水溶性和显著的药理作用。临床研究证实，柑橘类黄酮功能有：1、调节血脂，降低血液粘稠度，改善血清脂质，延长红血球寿命并增强造血功能，预防心脑血管疾病。2、抑制HL-60白血病细胞生长和溶解癌细胞的作用。3、能够有效清除体内的自由基及毒素，预防、减少疾病的发生。4、消炎、抗过敏、广谱抗菌、抗病毒作用。黄酮类物质既是药理因子又是重要的营养因子，是一类新发现的营养素，人体主要依靠从蔬菜、水果和谷物等食物中摄取一定量的黄酮，而黄酮类物质在体内代谢快需要不断的补充，柑橘类黄酮特有的生理活性已经得到了世界公认，目前市场上已有大量的以柑橘类黄酮作为膳食补充剂制成的各种保健品和食品，同时在化妆品以及医药产品中也得到了广泛应用。

柑橘生物类黄酮混合物尚未有正式的国家标准，在主要活性成分橙皮甙定量检测方面没有系统、完善的检测方法。《中国药典》中陈皮的橙皮甙测定方法为：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：醋酸：水(35：4：61)为流动相，供试品提取：在索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)80ml，加热回流2～3小时，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇80ml，再加热回流至提取液无色，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。该方案如用于柑橘生物类黄酮混合物中橙皮甙的测定，一是柑橘生物类黄酮混合物供试品溶液杂质太多，等度洗脱不能将杂质完全清除，二是索氏提取样品前处理复杂，前处理时间过长，该方法并不完全适用于柑橘生物类黄酮混合物橙皮甙的测定。因此，有必要针对柑橘生物类黄酮混合物的特点制定其中橙皮甙的检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种柑橘生物类黄酮中橙皮甙含量的测定方法，它操作简便、专属性和重复性好、回收率高，能够准确测定橙皮甙的含量，从而有效控制柑橘生物类黄酮混合物的质量。

本发明是通过以下方式实现的：柑橘生物类黄酮中橙皮甙含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）、稀释溶液的制备： 取20mmol/l的氢氧化钠溶液和50%甲醇溶液按0.5～1.5：1.5～0.5比例混合均匀；

（2）、对照品溶液的制备：精密称取橙皮甙和柚皮甙对照品适量，加稀释溶液制成橙皮甙和柚皮甙浓度均为0.10mg/ml的对照品溶液；

（3）、供试品溶液的制备：精密称取10-15mg样品于100ml容量瓶中，加入80ml稀释溶液，60～70℃超声10-20min，取出，冷却至室温后，用稀释溶液定容至刻度，取部分溶液用0.45μm微孔滤膜过滤后备用；

（4）、确定色谱条件：色谱柱：C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；流动相和梯度：流动相用0.45μm微孔滤膜过滤后，脱气；流动相A：0.1%三氟乙酸水溶液；流动相B：0.1%三氟乙酸的甲醇-乙腈1:1溶液；梯度洗脱时间见图1；柱温：35℃ ；流速：1ml/min ； 检测波长：292nm；保留时间：柚皮苷约 17.6min ； 橙皮甙约 18.0min；

（5）、检验程序：

    分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，在规定条件下，每针运行时间应三倍于橙皮甙的保留时间；

系统适应性条件：完全分离两种系统适应性物质，柱效应达到：理论塔板数大于2000，橙皮甙和柚皮甙的分离度大于1.5；

通过测得数据计算橙皮甙含量  橙皮甙%=A_样×C_对×100/A_对×W_样×100%  式中：C_对：橙皮甙标准工作溶液浓度mg/ml；A_样：样品峰面积；A_对：橙皮甙标准工作溶液峰面积平均值；W_样：样品的质量mg。

本发明操作简便、专属性和重复性好、回收率高，能够准确测定橙皮甙的含量，从而有效控制柑橘生物类黄酮混合物的质量。

附图说明

图1是本发明的梯度洗脱时间。

具体实施方式