[发明专利]2-（4-羟基苯亚胺基）-5-（3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基）-4-噻唑烷酮的制抗肿瘤药应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种噻唑烷酮衍生物在制备抗横纹肌肉瘤药物中的应用，尤其涉及一种2-（4-羟基苯亚胺基）-5-（3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基）-4-噻唑烷酮在制备抗横纹肌肉瘤药物中的应用。 

背景技术

横纹肌肉瘤发生率居软组织肉瘤的第三位，分位胚胎型，腺泡型和多形性三种。其中，胚胎型横纹肌肉瘤约占横纹肌肉瘤的2/3比例，其多发于8岁前的儿童。由于横纹肌肉瘤为肌肉细胞的癌变，这种细胞为全身性分布，所以身体各个部位都可发病，增加了它的治疗难度。 

目前治疗横纹肌肉瘤的方法主要包括药物化疗、外科切除以及放射治疗，但对于一些无法广泛切除的横纹肌肉瘤，只能依靠化疗和放疗的手段进行治疗。临床上用于治疗胚胎型横纹肌肉瘤的主要药物是长春新碱和更生霉素。但治疗效果不确定且治疗同时也存在着严重的不良发应，需要开发新的疗效稳定又毒副作用小的抗癌药物。 

噻唑烷酮类化合物是一类重要的杂环类化合物。在已上市的药物中，含有两个羰基的噻唑烷二酮类化合物作为口服降血糖药物。另外，研究发现2、4、5位含有羰基的噻唑烷酮类化合物具有抗菌抗感染抗病毒抗炎症等多种生物效应。近年来，噻唑烷酮的抗癌活性也引起了人们的注意，其中以4-噻唑烷酮在抗肿瘤方面的研究较为广泛。早期的研究报道，4-噻唑环核心结构的化合物具有明显的选择性杀死耐药性癌细胞尤其是肺癌细胞，并诱导细胞凋亡，而对正常细胞无抑制损伤作用。然而，2-（4-羟基苯亚胺基）-5-（3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基）-4-噻唑烷酮这个新型的噻唑烷酮衍生物在治疗横纹肌肉瘤方面的药理作用研究和应用，经权威机构检索查新，目前国内外尚未见报到。 

因此，研究和开发抗横纹肌肉瘤的噻唑烷酮衍生物药物具有极其重要的意义。 

发明内容

针对目前临床对横纹肌肉瘤治疗需求，本发明的目的在于提供一个新型噻唑烷酮衍生物即2-（4-羟基苯亚胺基）-5-（3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基）-4-噻唑烷酮在制备抗横纹肌肉瘤药物中的应用。 

本发明利用组合化学和药物化学方法，合成了一类4-噻唑烷酮类化合物的衍生物，运用横纹肌肉瘤细胞作为主要筛选模型，将所述化合物对人体胚胎型横纹肌肉瘤RD细胞进行体外高通量筛选，得到了一个能够有效降低RD细胞存活率的化合物2-（4-羟基苯亚胺基）-5-（3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基）-4-噻唑烷酮。经研究证实该化合物能够特异性抑制微管聚合和Dyrk1B激酶活性，从而引起RD细胞周期阻滞并诱导其凋亡，同时对正常的成肌细胞无明显毒副作用。 

本发明所述噻唑烷酮类化合物2-（4-羟基苯亚胺基）-5-（3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基）-4-噻唑烷酮的化学结构如通式（1）所示： 

本发明所述2-（4-羟基苯亚胺基）-5-（3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基）-4-噻唑烷酮在制备抗横纹肌肉瘤药物中的应用；其中，所述横纹肌肉瘤是胚胎型横纹肌肉瘤。 

上述化合物能有效抑制横纹肌肉瘤细胞生长，抑制细胞存活率IC₅₀浓度优选是0.65μM。 

上述化合物能引起人体胚胎型横纹肌肉瘤RD细胞显著细胞周期阻滞和细胞凋亡的浓度最优选是5.0μM。 

为了更好的理解本发明的实质及本发明所述化合物的作用效果，下面结合2-（4-羟基苯亚胺基）-5-（3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基）-4-噻唑烷酮的药理实验及结果，来进一步阐述其在抑制横纹肌肉瘤细胞增殖、引起横纹肌肉瘤细胞周期阻滞和诱导凋亡以及其对人体正常成肌细胞LHCN-M2的低毒效应中所具有的明显作用。 

横纹肌肉瘤细胞的制备：以常规方法培养横纹肌肉瘤细胞（人体胚胎型横纹肌肉瘤RD细胞），收集生长状态良好的且处于对数期的细胞，备用。 

人体正常成肌细胞的制备：体外培养人体正常成肌细胞（LHCN-M2细胞），在传代时需在皿底先铺一层明胶，以有利于LHCN-M2细胞贴壁生长。收集生长状态良好的且处于对数期的细胞，备用。 

采用细胞生物学和分子生物学方法进行如下实验，以观察2-（4-羟基苯亚胺基）-5-（3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基）-4-噻唑烷酮（下文简称化合物1）对横纹肌肉瘤细胞及正常成肌细胞的作用。 

1．定量分析化合物1对横纹肌肉瘤RD细胞的药效