[发明专利]一种从罗非鱼血液中提纯超氧化物歧化酶的方法

权利要求书

1.一种从罗非鱼血液中提纯超氧化物歧化酶的方法，其特征在于包括以下步骤：

a.红细胞破碎：将收集到的洁净罗非鱼血红细胞用1~2倍体积的双蒸水稀释后，在超声功率300~400W条件下作用15~20min进行红细胞破碎处理，然后5000×g离心15min，收集上层红细胞液；

b.乙醇、氯仿沉淀：先后加入无水乙醇和氯仿到红细胞液中，边加边搅拌，搅拌20min后，静置30min，然后10000×g离心15min，收集上清液；再用氮吹仪处理去除乙醇和氯仿；

c.热变性处理：将步骤b所得上清液在60℃条件下恒温水浴15~20min，冷却后10000×g离心15min，收集上清液；

d.阴离子交换：将步骤c所得上清液在多功能蛋白快速纯化液相色谱系统辅助下，采用阴离子交换法，制得SOD液。

2.根据权利要求1中所述的一种从罗非鱼血液中提纯超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：将得到的SOD液用可截留分子量为10KDa的膜系统离心超滤，进行脱盐和浓缩，收集浓缩液，并在-20℃条件下封存。

3.根据权利要求1中所述的一种从罗非鱼血液中提纯超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：所述的步骤b中先后按罗非鱼血红细胞体积比加入10~15%的无水乙醇和10~15%的氯仿。

4.根据权利要求1中所述的一种从罗非鱼血液中提纯超氧化物歧化酶的方法，其特征在于：步骤d中多功能蛋白快速纯化液相色谱系统中，配制1000ml pH8.0 20mmol/L的Tris-HCl缓冲液作为离子交换起始缓冲液；配制1000ml pH8.0 20mmol/L的Tris-HCl缓冲液并内含1mol/L NaCl作为离子交换洗脱缓冲液；用起始缓冲液将上清液加载到离子交换柱上，用洗脱缓冲液进行线性梯度洗脱，收集活性峰，即得高纯度SOD液。