[发明专利]以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，属于分析化学和纳米技术领域。

背景技术

肝癌一直被认为是全球最常见的恶性肿瘤之一，治愈率非常低。尽可能及早发现并进行手术切除是目前治疗肝癌最有效手段。甲胎蛋白是一种典型的肿瘤标志物，主要存在于肝癌细胞、卵黄囊细胞和其它恶性肿瘤患者的血清当中。正常情况下甲胎蛋白存在于胎儿发育的早期肝脏和卵黄囊中，出生后几个月至一年内降至正常水平。因此，除了孕妇和新生儿，人体内仅能检测到微量的甲胎蛋白，正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20ng/mL。当肝细胞发生癌变时，恢复了产生这种蛋白质的功能。在肝癌病人的血清样本检测中，甲胎蛋白的阳性率为75-80％。因此血清中甲胎蛋白含量不仅可作为原发性肝癌和畸胎瘤的早期诊断指标之一，也可作为疗效观察和愈后判断的指标。

目前，甲胎蛋白的临床检测多采用基于过氧化物酶的酶联免疫分析方法，由于过氧化物酶价格昂贵，容易失活，标记过程复杂。因此，寻找能够替代天然过氧化物酶的模拟酶和催化体系，并探寻优良的氢供体底物以提高模拟酶催化反应灵敏度是体外免疫诊断试剂和方法研发的新途径。纳米材料具有制备简单、经济、快捷、耐高温和耐酸碱、性质稳定等诸多优势，在模拟生物酶方面显示出极其诱人的应用前景。用纳米人工模拟酶替代在体外免疫诊断试剂中广泛使用的辣根过氧化物酶，不但能解决目前体外免疫诊断试剂的稳定性和检测准确性的问题，还能降低体外免疫诊断试剂的生产成本，提高检测灵敏度。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用裸纳米金为模拟过氧化物酶，标记抗体，采用双抗体夹心法建立了的新型的甲胎蛋白测定方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：所述的一种以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是以裸纳米金标记甲胎蛋白抗体，利用双夹心抗体法测定甲胎蛋白，裸纳米金催化过氧化氢氧化3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐，根据显色溶液的紫外吸收特征，来测定甲胎蛋白浓度。

所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是所使用的裸纳米金采用硼氢化钠还原氯金酸的方法制备，将500μL浓度为0.1g/L氯金酸水溶液用39.5毫升的水稀释，在剧烈搅拌下加入1.0毫升浓度为0.1g/L的硼氢化钠水溶液，反应溶液颜色从浅黄色变成酒红色，暗处继续快速搅拌而形成裸纳米金。

所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是以裸纳米金标记甲胎蛋白抗体，取22μg鼠抗人甲胎蛋白抗体加入1.0mL裸纳米金溶液，振荡反应30min，高速离心1h，除去上清，沉淀用1％BSA的PBS溶液洗涤两次后重新定容到1.0mL。

所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是双夹心抗体法测定甲胎蛋白是以过氧化氢和3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐为底物。

所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是利用裸纳米金催化过氧化氢氧化3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐的产物吸光度值A₄₅₀以判断甲胎蛋白的浓度。

所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是过氧化氢和3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐的体积比为1∶1，过氧化氢和3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐的体积优选为50μL。

所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是过氧化氢浓度为6.0mol/L。

所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是3，3’，5，5’-四甲基联苯胺盐酸盐的浓度为2.4mmol/L。

所述的以裸纳米金为模拟过氧化物酶的甲胎蛋白测定方法，其特征是显色反应为恒温45℃避光反应25min。