[发明专利]二氯喹啉酸在烟叶和植烟土壤中的残留检测方法

说明书

技术领域

 本发明属于水田除草剂残留的理化检测技术领域，主要涉及二氯喹啉酸在烟叶和植烟土壤中的残留检测方法。

背景技术

除草剂的应用极大地减轻了劳动强度, 直接或间接地提高了农业生产水平，对农业丰收起了很大的作用。但是, 除草剂不同于杀虫剂和杀菌剂, 使用要求更严格, 一旦使用不当, 就会产生药害。同时除草剂作为一种化学药品, 具有较强的稳定性, 若前茬作物使用了残留期长且难溶解的除草剂, 就容易导致后茬敏感作物产生药害。

二氯喹啉酸（Quinclorac），化学名称为3,7-二氯-8-喹啉羧酸，是一种激素型芽前芽后新型水田除草剂，具有用量少、残效期长、对稗草特效、施用期宽等优点。但由于盲目应用和增大剂量，从而导致作物产生药害，特别是在烟-稻轮作区土壤中的残留对后茬轮作物烟叶造成毒害。目前关于二氯喹啉酸在作物中的残留检测方法研究方法已有不少报道，但因烟草基质成分极其复杂，使得现有二氯喹啉酸残留检测方法应用于烟草时存在诸多问题和困难。

发明内容

为了明确其使用后在农田生态系统中的残留消解动态规律，本发明的目的旨在克服现有技术存在诸多问题和困难，提供一种二氯喹啉酸在烟叶和植烟土壤中的残留检测方法。采用液相色谱技术对植烟土壤和烟叶中二氯喹啉酸的残留检测分析方法进行研究，以期为指导烟叶安全生产提供科学依据。

本发明的技术方案是：一种二氯喹啉酸在烟叶和植烟土壤中的残留检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

①样品提取净化

土壤：称取土壤样品20g于250mL具塞锥形瓶中，加入60mL 0.05mol/L氢氧化钠提取溶剂，浸泡2h后振荡提取30min，5000r/min离心5min，取30mL上清液用磷酸调pH<2.5，加入乙酸乙酯激烈振荡进行液液萃取2次，每次30mL，振荡5min，收集合并乙酸乙酯相，过无水硫酸钠去残余水分，在40℃真空旋转蒸发器上浓缩至尽干，用甲醇定容至1mL，过0.45mm有机系滤膜后进液相色谱仪检测分析；

烟叶：称取磨碎的烟叶样品5g于250mL具塞锥形瓶中，加入40mL 0.05mol/L氢氧化钠溶液，浸泡2h后超声提取30min，5000r/min离心5min，取20mL上清液用磷酸调节pH<2.5，加入乙酸乙酯激烈振荡萃取2次，每次20mL，振荡5min，收集合并乙酸乙酯相，过无水硫酸钠去残余水分，在40℃真空旋转蒸发器上浓缩至尽干，用约3mL二氯甲烷溶解残渣和洗涤，转移至已活化的SPE柱上，用3mL甲醇与二氯甲烷按体积比5:95混合液预淋SPE柱，弃去流出液，用25mL甲醇与二氯甲烷按体积比3:7混合液洗脱，洗脱液在40℃真空旋转蒸发器上浓缩至尽干，用甲醇定容至1mL，过0.45m有机系滤膜后进液相色谱仪检测分析；

②色谱条件

检测器：DAD；色谱柱：Inertsil ODS-3，4.6mm×250mm, 5μm；流动相：乙腈与水体积比50:50，其中水用磷酸调pH值到4左右；流速：1.0mL/min；检测波长：225nm；进样量：20μL；以保留时间定性，峰面积外标法定量；在上述色谱条件下，二氯喹啉酸的保留时间为8.6min；

③基质配标标准曲线及方法的检出限

分别准确称取二氯喹啉酸标准品10mg于10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容，摇匀得1000mg/L的标准储备液。选用空白烟叶试样和土壤试样按①步骤的实验步骤提取后，分别得到空白烟叶和土壤样品提取液。用此空白基质，将二氯喹啉酸标准储备液稀释成20、10、5、2.5、1.0、0.5、0.25、0.10、0.01、0.05mg/mL的标准工作液；按前述色谱条件进行测定，采用外标法定量，即用农药标样所对应的峰面积为Y轴对其相应浓度为X轴进行线性回归分析，绘制标准曲线；

④加标回收率与精密度

准确称取20g土壤和5g烟叶，分别进行3个浓度水平的二氯喹啉酸标准溶液，使其含量为：土壤0.05、0.20和1.0mg/kg，烟叶0.10、1.0和5.0mg/kg，室温放置1h后，按照①步骤提取净化后，进行添加回收率试验，每个添加浓度平行重复5次操作，测定精密度。

上述土壤样品采自植烟大田0～15 cm表层土壤，经风干去杂研磨过孔径0.83mm筛后，保存于-20℃的冰箱中。

上述烟叶样品的烟叶采集烟田带回实验室，切碎混匀，缩分留样不少于500 g，保存于-20℃的冰箱中供试验用。

上述0.45m有机系滤膜为孔径0.45μm的再生纤维素膜。