[发明专利]单剂量猪肺炎支原体疫苗

说明书

发明领域

本发明涉及一种通过对约3至10日龄动物施以单剂有效量猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae）（M.hyo）疫苗来治疗或预防由猪肺炎支原体感染所致动物疾病或病症的方法。所述猪肺炎支原体疫苗可以是完全或部分灭活细胞或改良活体制剂、亚单位疫苗、或核酸或DNA疫苗。根据本发明施用的猪肺炎支原体疫苗可用合成或重组方法制备。

发明背景

猪肺炎支原体（M.hyo）是一种能引发猪地方性动物肺炎的细菌病原体。地方性动物肺炎是导致下列症状的慢性疾病：食物转化不良、发育障碍及继发性肺部感染易感性。猪肺炎支原体很容易通过呼吸道分泌物以及通过母猪-猪仔传递而进行传播，并在猪场中大规模流行。美国约有99%的猪群被感染，养猪业每年因此耗费约3亿美元。

已知的抵御猪肺炎支原体的疫苗大多数都是基于含佐剂的猪肺炎支原体全细胞灭活制剂。此外，基于免疫原性多肽或蛋白质的疫苗可以通过猪肺炎支原体基因的克隆和重组表达的方法进行合成或制备。能够在体内表达所述多肽或蛋白质的猪肺炎支原体基因也可用作疫苗。

全细胞灭活猪肺炎支原体疫苗的例子包括RESPISURE和STELLAMUNE，其均可从美国辉瑞公司获得。

另外，一些重组制备的可用作亚单位疫苗的猪肺炎支原体免疫原性多肽和蛋白质在本领域中已有描述。公开号为WO96/28472的国际专利申请中描述了6种猪肺炎支原体蛋白抗原，其分子量分别为46-48、52-54、60-64、72-75、90-94和110-114kDa，而且公开了分子量为52-54、60-64和72-75kDa的抗原的部分蛋白质序列以及分子量为46-48kDa的抗原的全长核苷酸序列和氨基酸序列。

编码猪肺炎支原体蛋白质P46的基因，即p46，也已经被Futo等人克隆（1995;J.Bacteriol 177:1915-1917）。该小组的研究表明体外表达的基因产物可用于诊断猪肺炎支原体感染的抗体免疫应答而不与其他种类的支原体发生交叉反应（Futo等,1995;J.Clin.Microbiol.33:680-683）。Futo等人描述的p46基因的序列和诊断用途进一步公开于欧洲专利0475185A1。

Wise和Kim（1987,J.Bacteriol.,169:5546-5555）报道了名为p70、p65（P65，同上）、p50和p44的4种猪肺炎支原体膜整合蛋白质，后3种经共价脂连接而被修饰，可诱导强的体液免疫应答。对该免疫应答的保护效果未做研究。编码P65蛋白质的基因也已克隆，其序列和在疫苗及诊断中的用途已描述于美国专利5,788,962。

国际专利申请WO91/15593公开了猪肺炎支原体的5种蛋白质，其表观分子量分别为150、90、85、70和43kDa。其中提供了编码85kDa蛋白质（蛋白质C）的编码基因的全长序列，以及编码其他4种蛋白质的部分核苷酸序列。

Faulds的美国专利US5,252,328公开了免疫反应性猪肺炎支原体蛋白质的氨基末端序列，其分子量为36、41、44、48、64、68、74.5、79、88.5、96和121kDa。其他根据电泳迁移率鉴定的而未公开蛋白质序列的蛋白质的表观分子量为22.5、34和52kDa。尽管US 5,252,328提及这些蛋白质可用于疫苗制剂，但未报道任何疫苗实验结果。

国际专利申请WO 95/09870公开了纯化猪肺炎支原体粘附素的生化方法，所述粘附素是支原体的膜整合蛋白，负责粘附到宿主的上呼吸道上皮细胞的纤毛上。WO 95/09870也建议了这些蛋白质的测试方法及用途，例如在疫苗和诊断方面的用途。

King等人的研究论文（1997;Vaccine 15:25-35）公开的分子量为124kDa的粘附素Mhp1是P97的一个菌株变体。

Wilton等人（1998，Microbiology 144:1931-1943）测定出了P97的一种94kDa变体。此外，研究表明p97基因是还编码名为P102的第二种蛋白质的操纵子的一部分，该第二种蛋白质的推测分子量约102kDa（Hsu等,1998,Gene 214:13-23）。Minion和Hsu在国际专利申请WO 99/26664中提出P102可用于疫苗，但未报道疫苗实验。