[发明专利]一株犬源地衣芽孢杆菌Y10及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株经分离而获得的耐酸、耐胆盐、抑菌效果好且能较显著改善犬肠道环境，促进微生态平衡从而降低腹泻率的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformi)Y₁₀及其在防治犬腹泻病方面的应用，属于预防兽医技术领域。 

背景技术

自上世纪八十年代以来，微生态制剂作为生物兽药和饲料添加剂已广泛用于仔猪、犊牛、羔羊、家禽等动物肠炎、腹泻病的预防和治疗上。目前专门用于宠物犬的国产微生态制剂还没有问世，临床上常使用人用微生态制剂如整肠生、益菌生等来调节犬的肠道菌群平衡，但效果并不理想。国外已出现了犬用微生态产品，但由于目前微生态制剂作为食品添加剂的相关标准尚不完善，生产质量控制薄弱，一些产品达不到包装上所标示的活菌数量，有的产品根本就不含有活菌(任普军.2006.新兽医，6：48-50)，从而导致产品达不到治病、防病的作用，宠物用微生态制剂整体质量水平比较低，完全不能满足宠物市场快速发展的需要。从2006年1月开始，欧盟已全面禁止在动物饲料中添加抗生素(刘兴海.2007.现代畜牧兽医，5：35-36)。随着抗生素在我国的限用，甚至禁用，该病在我国养犬业中将越来越严重。因此，开发犬用微生态制剂，不仅对生态养犬和环境治理有重要意义，而且给生物兽药业和饲料工业带来巨大的经济效益。目前许多国外学者对乳酸杆菌应用于犬的研究较多，而对芽孢杆菌应用于犬的研究不足(刘昆.2008.饲料工业，15：54-55)。 

益生菌(又叫微生态制剂，或微生物制剂，或微生物饲料添加剂)是最先被提出的抗生素替代品，它的作用主要在于扶植正常微生物菌群，调节生态平衡(李长强.2010.江西饲料，2：21-24)。迄今为止尚未见到有关地衣芽孢杆菌Y₁₀的筛选及其在防治犬腹泻病中的应用的报道。 

发明内容

针对目前抗生素的滥用及禁用导致疾病很难治愈的情况以及犬感染细菌导致腹泻病后难以治愈或无法治疗等问题，本发明的目的是提供一株具有耐酸、耐胆盐、抑菌效果好的地衣芽孢杆菌Y₁₀；同时也提供该地衣芽孢杆菌Y₁₀在兽药或饲料中的应用，可用以预防和治疗犬腹泻病并调整犬肠道微生态平衡，提高肠道微生物多样性。 

本发明参考益生菌可用于临床上预防和治疗动物疾病的思维，从健康犬粪样中筛选出耐酸、耐胆盐，抑菌效果好的地衣芽孢杆菌Y₁₀及菌剂，然后利用该菌剂在兽药或犬日粮中的应用，证明添加本发明菌剂Y₁₀后，可以预防和治疗犬腹泻病；同时发现菌剂Y₁₀的应用能显著提高犬肠道微生物的多样性，调整犬肠道微生态平衡，改善犬生长性能。 

具体讲，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 

本发明获得具有耐酸、耐胆盐，抑菌效果好的地衣芽孢杆菌Y₁₀的方法是(见图1)：采集健康犬粪样，用蒸馏水稀释后，用不同筛选培养基进行分离培养和鉴定，得到一株对葡萄球菌、大肠杆菌CVCC2060、绿脓杆菌、大肠杆菌ATCC25922、沙门氏菌339有显著抑制作用的菌株Y₁₀，然后进行耐酸、耐胆盐试验。通过PCR扩增出菌株H₂的16S rDNA片段，经测序获得目的基因序列。用美国生物信息学中心(NCBI)的BLAST程序对所初步获得的菌株H₂的16S rDNA序列进行登录， 获得登录号为FJ549021(GenBank(Http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/)，与已收录的序列进行核苷酸同源性比较。经过微生物学分类鉴定，确定该分离的菌株Y₁₀为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y₁₀，该菌株已于2011年4月20日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为：CCTCC NO：M2011134。 

本发明地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformi)Y₁₀(以下简称为“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”或“地衣芽孢杆菌Y₁₀”)按照常规甘油冷冻方法保藏。