[发明专利]一种弥洛松甙的提纯工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种弥洛松甙的提纯工艺，属于医药领域。

背景技术

弥洛松甙来源于罗汉松科(Podocarpaceae)弥洛松Prumnopitys ferruginea(D.Don)Laubenf.的枝叶。弥洛松甙可溶于醇类有机试剂，溶于水，极性大。现代药理研究表明弥洛松甙具有多种生活性：细胞毒活性，对P388细胞的IC50为19μg/ml，对猴肾细胞株(BSC)也有活性；抗菌作用，在150μg/disk时，对大肠杆菌和枯草杆菌的抑菌圈直径(mm)为3和6；抗真菌活性。在150μg/disk时，对白色念珠菌和须发癣菌的抑菌圈直径(mm)为1和9。

目前尚未见弥洛松甙工业分离制备方法的相关报道。

发明内容

本发明目的是提供一种简单、提率较高的弥洛松甙提纯工艺。

本发明是通过以下技术方案实现的。

一种弥洛松甙的提纯工艺，其特征在于：

1）把原料粉碎至20-80目，加入5-15倍量70%乙醇溶液，微波提取1-2h，提取1-3次，合并提取液；

2）上述提取液减压回收乙醇至浸膏状，加水溶解，滤出不溶物，滤液加入大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用4-7BV40-50%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液；

3）上述洗脱液加入超滤膜超滤，透过液再加入纳滤膜浓缩，得浓缩液；

4）上述浓缩液通过制备型液相色谱分离纯化得到弥洛松甙。

所述步骤1）中微波提取功率为1-10kw，提取温度控制在40-50℃。

所述步骤2）中大孔树脂可选AB-8、NAK-II、ADS-7或SPD100中的一种。

所述步骤3）中超滤膜为截留分子量3000-10000的中空复合膜，纳滤膜选截留分子量100的中空复合膜，进口压力控制0.4-0.7Mpa。

所述步骤4）中制备型液相色谱的流动相为33%甲醇溶液。

本发明采用大孔树脂吸附，富集量大，除杂质效果好；洗脱液用生物膜截流浓缩，能耗低，并且避免温度过高发生物质变化；采用制备型液相色谱法，制备量大，产品纯度高，可实现连续生产；整个工艺操作简单，易挥发毒性溶剂使用量少，对操作人员危害程度减小。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。

实施例1：

将弥洛松的枝叶粉碎至20目，取5kg投入微波提取罐，加入25L70%乙醇溶液微波提取1h，微波提取功率为10kW，提取温度控制在50℃，提取3次，合并提取液，减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L NAK-II大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用20L40%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量3000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制0.5Mpa得浓缩液；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以33%甲醇溶液为流动相，将浓缩液加少量流动相溶解，进样，紫外在线监测，检测波长为213nm，收集目标成分，浓缩，冷冻干燥即得弥洛松甙，含量为95.7%。

实施例2：

将弥洛松的枝叶粉碎至60目，取5kg投入微波提取罐，加入75L70%乙醇溶液微波提取1h，微波提取功率为1kW，提取温度控制在40℃，提取1次，合并提取液，减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L AB-8大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用35L50%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量10000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制0.5Mpa得浓缩液；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以33%甲醇溶液为流动相，将浓缩液加少量流动相溶解，进样，紫外在线监测，检测波长为213nm，收集目标成分，浓缩，冷冻干燥即得弥洛松甙，含量为96.3%。

实施例3：