[发明专利]一种涂抹平板菌落的方法

说明书

技术领域：

本发明属于微生物领域，具体涉及一种涂抹平板菌落的方法。

背景技术：

涂抹平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成，这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其涂抹均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数，是国家食品卫生标准规定的重要微生物活菌检测计数方法之一。广泛应用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定以及食品、环境卫生和科研等领域。涂抹平板计数法的关键在于涂抹效果，这直接影响到计数结果的准确性。目前，国内外大都采用涂抹棒（或刮铲）进行平板涂抹。但涂抹棒（或刮铲）涂抹的缺点是操作要求比较高，且费时、费力，最重要的是涂抹棒（或刮铲）在来回涂抹的时产生的剪切力，会使细胞结构破裂而死亡，从而出现检测结果偏低的现象。

发明内容：

本发明的目的是提供一种更加方便、快速和可靠的涂抹平板菌落的方法，以克服现有技术中用涂抹棒（或刮铲）时操作要求比较高，且费时、费力以及检测结果偏低等缺点。

本发明的涂抹平板菌落的方法，其特征在于，将经均质处理使所含活菌分散均匀的样液移到含培养基的培养皿中，然后倒入若干个已灭菌的钢珠，盖上培养皿盖，晃动培养皿，使里面的钢珠动起来，并朝不同方向做无规则运动，使样液分散均匀，再停止晃动，将钢珠倒出，反转培养皿，常规条件下培养。

优选，所述的培养皿为直径为9cm的培养皿，所述的钢珠的直径为3mm，表面光洁度为所述在培养皿中倒入若干个已灭菌的钢珠，其数量为6~10个/个培养皿，进一步优选为7个。

本发明的有益效果如下：

1.本发明利用钢珠涂板，钢珠涂板可以克服用涂抹棒或刮铲时产生的剪切力，减少因此导致的细胞结构破裂死亡，提高了涂抹平板计数的准确率。

2.本发明通过轻微晃动培养皿，使钢珠做无规则的运动来涂抹，能迅速将样液涂布均匀，不需要不停的转动涂抹棒或刮铲，较涂抹棒或刮铲操作简便，省力。

3.本发明可以通过多个培养皿的重叠，同时晃动达到多个培养皿进行涂抹，解决了用涂抹棒（或刮铲）一次只能涂抹一个的问题，这既省力又省时，提高效率，明显减少了常规用涂抹棒（或刮铲）涂抹的工作量。

4.本发明在整个涂抹过程中，培养皿开启的时间很短，所以培养基与外界接触的时间短，从而克服了涂抹棒（或刮铲）涂抹时始终要使培养皿处于开启的状态，与外界接触时间较长的缺点，显著降低涂抹时被污染的机率。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

以下实施例（除实施例1外）所用的钢珠直径为3mm的小钢珠，其表面光洁度可以在2mL离心管中装入7粒直径3mm的小钢珠，然后置于121℃高压灭菌0.5h备用。涂抹棒为：澳大利亚进口的微生物实验专用耐高温有机塑料涂抹棒，外三角边长6cm，内三角边长4.5cm，直径为0.5cm，手柄长18.5cm。

实施例1：

以产酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）为样品材料，从斜面培养基上挑取一环产酸克雷伯氏菌SZ7-1到LB培养液（公知培养基，250mL的三角瓶装50mL培养液）中，然后在30℃温度下，150r/min转速的摇床中震荡培养24h。用移液枪取1mL培养好的菌液，采用梯度稀释法稀释至10^-7，并从最后稀释好的、摇晃打散使活菌分散均匀的试管中取100μL加入不同的灭菌的、含有LB固体培养基的直径9cm的培养皿中。将培养皿上盖开启一小口，在不同的培养皿中倒入不同个数的已经灭菌好的直径为3mm、表面光洁度的小钢珠，钢珠的个数见表1所示，合上培养皿盖子，然后轻轻的晃动培养皿，使里面的钢珠动起来，并朝不同方向做无规则运动，使菌液分布均匀，几秒钟后，停止晃动，将钢珠倒出，盖上培养皿盖，反转培养皿，置于室温下常规培养。待长出单菌落后进行统计，其结果如表1所示。

表1：不同钢珠数目涂布试验结果（CFU/mL）