[发明专利]一种测定超氧化物歧化酶活性的方法

权利要求书

1.一种测定超氧化物歧化酶活性的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤a、超氧阴离子产生体系缓冲溶液的配制

配制pH值为8.5 ~9.5的30~50毫摩尔/升的碳酸氢铵缓冲溶液；

步骤b、标准品的配制

用步骤a中的碳酸氢铵缓冲溶液将标准品配成浓度为50微摩尔/升的标准溶液，所述的标准品为2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐；

步骤c、对照品、样品和空白样品的制备

对照品的制备：取40微升0.4~8毫摩尔/升乙二胺四乙酸二钠盐，加入40微升生理盐水，加入40微升50微摩尔/升的2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐，最后加入40微升1毫摩尔/升邻苯三酚水溶液，37℃反应8~20分钟后，作为对照品，供内置紫外可见分光光度计的酶标仪测定；

样品的制备：取40微升0.4~8毫摩尔/升乙二胺四乙酸二钠盐，加入40微升超氧化物歧化酶溶液，加入40微升50微摩尔/升的2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐，最后加入40微升1毫摩尔/升邻苯三酚水溶液，37℃反应8~20分钟后，作为样品，供内置紫外可见分光光度计的酶标仪测定；

空白样品的制备：取40微升0.4~8毫摩尔/升乙二胺四乙酸二钠盐，加入40微升超氧化物歧化酶溶液，加入40微升50微摩尔/升的2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐，最后加入40微升水溶液，37℃反应8~20分钟后，作为空白样品，供内置紫外可见分光光度计的酶标仪测定；

步骤d、对照品、样品和空白样品的检测

设定紫外-可见检测波长为450纳米，在内置紫外可见分光光度计的酶标仪中对步骤c中制备的对照品、样品和空白样品进行测定，得到对照品、样品和空白样品的吸光度值A_对照品、A_样品和A_空白样品； 

步骤e、超氧化物歧化酶的活性的计算

超氧化物歧化酶对超氧阴离子的清除率按照以下公式计算：

I_样品 = [A_对照品 -（A_样品 - A_空白样品）]/ A_对照品 × 100%

式中，I为超氧化物歧化酶对超氧阴离子的清除率；

A_对照品为对照品中2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐的产物水溶性甲臜的吸光度值，无量纲；

A_样品为样品中2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐的产物水溶性甲臜的吸光度值，无量纲；

A_空白样品为空白样品中2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2'4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐的产物水溶性甲臜的吸光度值，无量纲；

超氧化物歧化酶活性的计算公式如下：

超氧化物歧化酶活性=I / ( 1 – I ) 

式中，I为超氧化物歧化酶对超氧阴离子的清除率；超氧化物歧化酶活性单位为U。

2.如权利要求1所述的测定超氧化物歧化酶活性的方法，其特征在于， 步骤a中所述的缓冲溶液pH值为9.0 ~9.5。

3.如权利要求2所述的测定超氧化物歧化酶活性的方法，其特征在于， 步骤a中所述的缓冲溶液pH值为9.3。

4.如权利要求1所述的测定超氧化物歧化酶活性的方法，其特征在于，步骤c中所述的乙二胺四乙酸二钠盐的浓度为0.4~2毫摩尔/升。

5.如权利要求4所述的测定超氧化物歧化酶活性的方法，其特征在于，步骤c中所述的乙二胺四乙酸二钠盐的浓度为2毫摩尔/升。