[发明专利]一种检测髓过氧化物酶的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，特别是涉及一种检测髓过氧化物酶同型或亚型的免疫测定方法及试剂盒。 

技术背景

髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)是中性粒细胞嗜天青颗粒产生的一种重要的过氧化物酶，主要存在于嗜中性粒细胞和单核细胞中。成熟的MPO由两个亚单位聚合而成，每个亚单位由一个59-64kDa的重链和一个14kDa的轻链构成，每个亚单位中含有一个共价结合的血红素，具有MPO特有的绿色光谱特性。MPO能催化过氧化氢与氯的反应产生次氯酸，具有很强的抗微生物作用，在机体产生和调节炎症反应方面发挥作用。然而，MPO催化反应生成过量的氧化剂时，会导致氧化应激和氧化性组织损伤。 

髓过氧化物酶的活性与人类多种疾病的发生、发展密切相关，神经炎症疾病方面包括：多发性硬化症，阿尔茨海默氏症，帕金森氏症和中风等。其他炎性疾病如：慢性阻塞性肺病，囊肿性纤维化，动脉粥样硬化，炎症性肠病，疾病，肾小球损伤和类风湿关节炎。肺癌也显示和MPO水平升高有关。此外，根据之前的研究显示，MPO水平和心血管疾病密切相关。然而，这些以往的研究都没有涉及MPO同型和/或亚型与特定的疾病状态存在具体相关。 

目前，用于检测MPO的方法有酶联免疫吸附法、光激化学发光检测法、流式细胞仪测定法、毛细管电泳法等。然而这些方法均未涉及到对MPO同型或亚型的检测。因此，急需一种专门检测MPO同型或亚型的检测方法，用于鉴定过敏症、炎症、心血管疾病或自身免疫性疾病的状态。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一种高特异性的检测分析方法，特别是一种高特异性和高灵敏度的检测MPO同型或亚型或其组合物中的至少一种的方法，包括： 

(a)所述MPO同型、亚型或其组合物中的至少一种能够和所述MPO同型、亚型或其组合物的特异性结合的包被抗体结合。 

(b)所述MPO同型、亚型或其组合物中的至少一种与一个标记抗体中结合；从而辅助诊断或预后过敏性疾病、炎症性疾病、心血管疾病或自身免疫性疾病的状态；本发明进一步提供用于实施所述方法的试剂盒。 

下面提供一种新的诊断或预后分析MPO同型或亚型的方法。 

本发明公开了一种评估患者是否有过敏性疾病、炎症性疾病、心血管疾病或自身免疫性疾病的诊断实验。另一方面，公开了一种评估患者发展为过敏性疾病、炎症疾病、心血管疾病或自身免疫性疾病风险的预后检测方法。可以确定的是，所述方法包括不同的检测实验样本中的MPO同型或亚型的方法。 

尽管一些方法、设备和材料和本发明所述相似或相同，能够用于实现本发明权利要求所述的方法，但是，本发明所述的是特殊的方法、设备和材料。 

本发明提供了一种辅助诊断或预后过敏性疾病、炎症疾病、心血管疾病或自身免疫性疾病状态的方法，通过检测样本中至少一种，而不是全部MPO同型或亚型或其组合，所述方法包括： 

(a)所述MPO同型或亚型或其组合中的至少一种，而不是全部，与所述特异性结合包被抗体发生特异性结合反应。 

(b)所述MPO同型或亚型或其组合中的至少一种，而不是全部，与所述标记抗体结合。 

所述MPO同型或亚型或其组合能够被所述的具有MPO同型或亚型或其组合中的至少一种特异性结合的标记抗体检测，或和标记过的MPO同型或亚型或其组合中的至少一种竞争性结合。进一步的，标记抗体与所述MPO同型中的特异性结合，但是不能和MPO亚型结合。 

进一步而言，对MPO同型或亚型或其组合中的至少一种的检测是和过敏性疾病、炎症疾病、心血管疾病或自身免疫疾病相关的。所述炎症疾病主要指肠炎症疾病；所述自身免疫性疾病是急性播散性脑脊髓炎，阿狄森氏病，强直性脊柱炎，抗磷脂抗体综合征，再生障碍性贫血，自身免疫性肝炎，腹腔疾病，克罗恩病的糖尿病，桥本氏病，特发性血小板减少性紫癜，红斑狼疮，多发性硬化症，重症肌无力，视神经炎，天疱疮，原发性胆汁性肝硬化，类风湿关节炎，干燥综合征，自身免疫性溶血性贫血或韦格纳肉芽肿中的一种。 

本发明所述包被抗体为单克隆抗体、单一特异性多克隆抗体或抗体结合片段。进一步而言，包被抗体是偶联到具有蛋白偶联表面的固相支持物上的，这种具有蛋白偶联表面的固相支撑物可以是一种微孔板，一种胶体金粒子，一种氧化铁离子或聚珠。