[发明专利]抑制PARP活性的RNAi用于生产治疗癌症的药物的用途

说明书

本申请是申请日为2004年7月23日、发明名称为“抑制PARP活性的RNAi用于生产治疗癌症的药物的用途”的中国专利申请200480027294.1(国际申请号PCT/GB2004/003235)的分案申请。

技术领域

本发明涉及抑制介导DNA链断裂修复的酶的活性的活性剂用于治疗某些形式的癌症，尤其乳腺癌的用途。

背景技术

已表明在哺乳动物细胞中，同源重组(HR)在发生在DNA复制叉的损伤修复中起重要的作用(2)。从而，HR缺陷细胞表现为生长迟缓并显示出更高水平的遗传不稳定性。认为人类癌症中由于HR修复的丧失导致的遗传不稳定性明显促进了这些细胞中癌的发展(1)。

响应DNA链的断裂，由聚(ADP-核糖基)化(PARP)对核蛋白质的转录后修饰在DNA修复、程序性细胞死亡的调节以及基因组稳定性的维持中起着重要的作用。

聚(ADP-核糖)聚合酶(PAPR-1)是哺乳动物细胞中大量存在的一种核蛋白质，它利用NAD⁺作为底物催化形成聚(ADP-核糖)(PAR)多聚体。一旦发生DNA损伤，PAPR-1迅速结合DNA链断裂(单链或双链)并催化向自身(自修饰)和其他蛋白质加入带负电的PAR链(综述见[3,4])。认为PAPR-1与DNA链断裂的结合保护DNA损伤被进一步加工，直到通过PAR多聚体导致的积聚的负电荷使PAPR-1从断裂解离(5，6)。

虽然PAPR-1与一些核过程，比如染色质结构的调节、DNA复制、DNA修复和转录有关，但是PAPR-1敲除小鼠却正常发育(7)。从这些小鼠分离的细胞表现为过度重组表型和SCE水平升高、微核和四倍性的遗传不稳定性(8-10)。通过端粒缩短、染色体融合频率增加和非整倍性也可以在这些PAPR-1敲除小鼠中发生遗传不稳定性(11)，尽管所有这些结果在另一组PARP-1敲除小鼠中不能重复(12)。在前一小鼠敲除中，PAPR-1无效突变挽救了SCID小鼠中受损的V(D)J重组(13)。这些结果支持Lindahl和同事提出的观点，即PARP-1有抵抗重组的保护作用(5)。他们提出PARP-1与DNA链断裂结合防止重组机器识别并处理DNA损伤，或者备选地，聚ADP-核糖基化后积累的负电荷排斥邻近重组DNA序列。只有后一模型与PARP-1的自身抑制和显性失活突变体PARP-1的表达、诱导SCE、基因扩增和同源重组相一致(HR[14-18])。

基于PARP抑制剂处理的细胞或者来源于PARP-1或PARP-2敲除小鼠的细胞的研究表明，PARP-1活性的抑制增加细胞对于DNA损伤剂的敏感性，并且抑制链断裂重接(3,4,8-11,19,20,47)。

PARP-1活性的抑制剂已经与常规抗癌剂如放射疗法和化学疗法联合使用(21)。抑制剂与甲基化剂、拓扑异构酶毒物及离子化放射联合使用，发现它可以提高这些治疗形式的有效性。然而，我们知道此类治疗导致对非癌细胞或者“健康”细胞的伤害和死亡，并与一些令人讨厌的副作用有关。

因此现在需要一种癌症治疗，其既有效又可以选择性地杀死癌细胞而且不必与放射治疗和化学治疗联合使用。

本发明人令人惊奇地发现，与野生型细胞相比，同源重组(HR)缺陷的细胞对PARP抑制剂超敏感。这是令人惊奇的，因为PARP-1敲除小鼠正常生活，说明PARP-1对于生命并不是必需的。从而，不能预期细胞将对PARP抑制敏感。

根据本发明的第一个方面，提供了抑制介导DNA链断裂修复的酶的活性的活性剂用于生产治疗由介导同源重组的基因中遗传缺陷导致的疾病的药物的用途。

另一个方面，本发明提供了治疗哺乳动物(包括人类)中疾病或者状况的方法，所述疾病或状况是由于介导同源重组的基因中的遗传缺陷引起的，所述方法包括对所述哺乳动物施用治疗有效量的活性剂，该活性剂抑制介导复制叉中存在的DNA链断裂或其它损伤的修复的酶的活性。

在优选的方面，所述酶是PARP。在更优选的方面，所述活性剂是PARP抑制剂或者对PARP基因特异的RNAi分子。

在进一步优选的方面，所述用途是癌症的治疗。

优选地，所述药物是药物组合物，其由PARP抑制剂和可药用载体或稀释剂组成。

同源重组缺陷肿瘤对PARP-1抑制剂的特异敏感性意味着患者体内正常分裂的细胞将不受治疗的影响。用PARP-1抑制剂治疗同源重组缺陷癌细胞还有一个好处，就是它不必和常规的放射疗法或化学疗法一起施用作为联合疗法，从而避免了与这些常规形式的治疗相关的副作用。