[发明专利]一种食用菌调节剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种食用菌调节剂，属于食用菌栽培技术领域。 

背景技术

目前应用于食用菌增产方面的物质主要是化学制剂和激素类产品，如三十烷醇、黄腐酸、尿素等，该类产品增产效果在10%—30%之间。现有使用后存在化学残留，对产品及环境都会造成不同程度的污染，对产品的品质也有不利影响，不符合绿色食品生产的要求。 

发明内容

本发明的目的是提供一种无污染、无残留且有效提高食用菌产量和质量的食用菌生长调节剂。 

本发明采取的技术方案： 

一种食用菌调节剂，包括重量比为0.2~0.5：90~95的EccPR蛋白和水，所述EccPR蛋白是按照如下方法提取得到：

（1）将mini-Tn5-Km转座子插入胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐亚种Erwinia carotovora subsp. Carotovora strain Ecc 601中，筛选出不能使烟草叶片出现过敏反应即叶片上出现坏死斑的突变菌；

（2）利用转座子mini-Tn5-Km上的Km标签，通过RACE-PCR扩增上述突变菌中转座子插入点两端的DNA片段，经过测序拼接后，获得DNA序列；

（3）将步骤（2）得到的DNA序列连接到pET30a(+)上，并将其转入到大肠杆菌E.coli BL21中，获得工程菌E.coli BL21（pET30a-EccPR）；

（4）将工程菌E.coli BL21（pET30a-EccPR）诱导培养获得具有植物免疫激活作用的免疫激活蛋白；

所述软腐欧文氏菌Erwinia carotovora subsp. Carotovora strain Ecc 601于2012年8月15日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No. 6433。

为进一步提高增产效果，本发明食用菌调节剂还包括水解氨基酸，三者的重量比为EccPR蛋白：水：水解氨基酸=0. 2～0.5：90～95：5～8，所述水解氨基酸为市售的蛋白水解氨基酸。按上述重量百分比，将上述三种成分混匀，即得所述的食用菌生长调节剂。 

本发明可用于食用菌栽培料的拌种及食用菌生长过程中喷施，食用菌调节剂用于拌料使用时按1：3500倍使用，用于喷施使用时1000-1200倍稀释使用。 

本发明食用菌调节剂的主要优点是： 

（1）增产效果显著，本发明产品中存在食用菌生长所需的营养成分，对食用菌生长具有很好的促进作用，与清水对照相比能增加产量25%-40%。

（2）提高食用菌品质，本发明产品中不含化学肥料及激素，无任何有毒有害难降解成份，在食用菌生产中使用具有无毒、无污染、无残留的优点，符合我国生产绿色食品的要求，为食用菌安全生产及食品安全提供了必要保证，具有良好经济效益和社会效益。该产品可广泛应用于平菇、金针菇、滑子菇、香菇等食用菌的生产。 

具体实施方式

下面对本发明的技术方案作详细说明，以下实施例是以本发明技术为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述实施例。 

以下实施例中，所用EccPR蛋白是利用本实验室所筛选的软腐欧文氏菌Erwinia carotovora subsp. Carotovora strain Ecc 601（于2012年8月15日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No. 6433），通过分子生物学方法将EccPR蛋白表达基因构建了工程菌E.coli BL21（pET30a-EccPR），获得EccPR蛋白。 

具体提取步骤如下： 

（1）将mini-Tn5-Km转座子插入软腐欧文氏菌Erwinia carotovora subsp. Carotovora strain Ecc 601中，筛选出不能使烟草叶片出现过敏反应即叶片上出现坏死斑的突变菌；

（2）利用转座子mini-Tn5-Km上的Km标签，通过RACE-PCR扩增上述突变菌中转座子插入点两端的DNA片段，经过测序拼接后，获得DNA序列；

（3）将步骤（2）得到的DNA序列连接到pET30a(+)上，并将其转入到大肠杆菌E.coli BL21中，获得工程菌E.coli BL21（pET30a-EccPR）；