[发明专利]昆虫和节肢动物体中脂溶性有效成分的提取方法和抗菌活性筛选方法

说明书

本发明是有关于一种昆虫和节肢动物体中脂溶性有效成分的提取方法和抗菌活性筛选方法，其包含取干燥后的昆虫或节肢动物体虫体，在室温下用二氯甲烷浸提2次；浸提液经真空抽滤，合并滤液，减压回收溶剂，得昆虫二氯甲烷粗浸膏；将所得的粗浸膏置于蒸发皿中，在40‑50℃条件下，水浴加热6‑8h，再将粗浸膏与蒸馏水按1:2‑4的体积混合，然后经石油醚萃取静置分层，回收水相；将水相浓缩后，转到蒸发皿中至水浴上约40‑50℃烘干，得去除虫蜡的昆虫和节肢动物体中脂溶性有效成分。抗菌活性筛选以革兰氏阳性菌和阴性菌菌株为研究对象，以抗生素为阳性对照，70%的甲醇为空白对照，抗菌活性强度以平板法测定的抑菌圈直径大小衡量对比。

技术领域

本发明涉及一种昆虫和节肢动物体内脂溶性提取工艺,特别是涉及一种在提取昆虫和节肢动物体中脂溶性有效成分过程中，选择合适的溶剂和适宜的温度等因素，而不影响其有效成分的结构和活性。

背景技术

昆虫天然产物的研究，是近些年来天然产物领域研究的新方向。相对于研究原料的种类丰富，但产量较贫瘠；另外昆虫体内成分属微量，但可能结构复杂；虫体在不同虫龄期，次生代谢物作为物质基础，可能出现的结构变化等等，综上昆虫特点，当前制约昆虫天然产物研究的瓶颈，被认为主要是昆虫和节肢动物体内的有效成分的提取方法的建立，以及对分离纯化出的活性成分的生物学评价。鉴于对昆虫天然产物的研究，国内外仍在探索阶段。我们先前建立的“两段溶剂提取法”(中国发明专利：一种昆虫或节肢动物次生代谢物的提取方法中国发明专利201110249570.0)，可有效地对极性的活性成分进行分离纯化及结构鉴定研究。非极性的二氯甲烷脂溶性提取物，抗菌活性测定受到溶剂二氯甲烷和昆虫大量虫蜡成分的影响。

通过我们的研究发现，昆虫体内存在着活性小分子天然化合物具有生物学多样性活性，而且多为极性化合物。非极性的脂溶性化合物，如三萜类、酯类等化合物多呈微量，通常与昆虫的虫蜡部分共存。而这些虫蜡多为油脂或脂肪酸成分，它们又是昆虫脂溶性成分的主要和大量物质，自身没有生物活性，而且影响其它活性脂溶性成分的提取，因此为获取这些油脂成分中可能存在着的微量的活性化合物，必须进行预处理除去大量的昆虫的油脂。

本发明旨在解决昆虫和节肢动物体内脂溶性提取物的除油工艺问题，为分离纯化其中微量天然有效化合物成分，并进行生物活性评价等奠定基础。这个前处理过程中，必须保证对这些微量有效活性成分的不丢失，进一步还要考虑，在提取过程中由于采用的溶剂法，溶剂和温度的因素，影响到它们的结构和活性的改变，因此这个提取技术是本发明的关键。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种新的昆虫和节肢动物体中脂溶性有效成分的提取方法和抗菌活性筛选方法，所要解决的技术问题是解决昆虫和节肢动物体内脂溶性提取物的除油工艺问题，为分离纯化其中微量天然有效化合物成分，并进行生物活性评价等奠定基础。这个前处理过程中，必须保证对这些微量有效活性成分的不丢失，进一步还要考虑，在提取过程中由于采用的溶剂法，溶剂和温度的因素，不会影响到它们的结构和活性的改变，非常适于实用。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的其包含以下步骤：取干燥后的昆虫或节肢动物体虫体，在室温下用二氯甲烷浸提2次，每次浸提48-72小时并辅以超声操作；浸提液经真空抽滤，合并滤液，减压回收溶剂，得昆虫二氯甲烷粗浸膏；将所得的粗浸膏置于蒸发皿中，在40-50℃条件下，水浴加热6-8h，至浸膏中的二氯甲烷挥发完全；将粗浸膏与蒸馏水按1:2-4的体积混合，然后转移到分液漏斗中，加入石油醚震摇萃取，静置后分层，取下层水相，按照上述操作再次萃取1-2次，回收水相；将水相浓缩后，转移到蒸发皿中至水浴上约40-50℃烘干，得到去除虫蜡的昆虫和节肢动物体中脂溶性有效成分。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

前述的昆虫和节肢动物体中脂溶性有效成分的提取方法,其中所述的昆虫为黑蚂蚁或五谷虫；所述的节肢动物体为蝼蛄或全蝎。