[发明专利]一株从玉米浸泡水中分离筛选出的L-乳酸产生菌

说明书

技术领域

本发明涉及一株L-乳酸产生菌。 

背景技术

在玉米淀粉湿法生产中，玉米浸泡过程不仅是物理扩散过程，同时也是生物化学变化过程。这得益于玉米粒本身所带有的乳酸菌。所以玉米浸泡水中肯定有乳酸菌的存在。 

L-乳酸被广泛应用于食品和医药等领域，尤其是近年来利用L-乳酸为原料生产生物可降解塑料，即聚乳酸的迅速发展，对于解决日益严重的白色污染问题具有重要意义。 

因此筛选L-乳酸产生菌，将其单独应用于玉米浸泡过程中，大量积累L-乳酸，对玉米浸泡水加以利用、变废为宝，将是十分必要的。 

发明内容

本发明提供一株从玉米浸泡水中分离筛选出的L-乳酸产生菌，目的在于将其单独应用于玉米浸泡过程中，大量积累L-乳酸，对玉米浸泡水加以利用、变废为宝。 

本发明采取的技术方案是：一株从玉米浸泡水中分离筛选出的L-乳酸产生菌，BaciLLus coaguLans，该菌株的16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID No.1所述，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No. 6382，保藏日期2012年7月19日，保藏单位地扯：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 

本发明所述的L-乳酸产生菌能够高效利用玉米浸泡水、并且大量积累L-乳酸。 

本发明利用工厂玉米浸泡水经稀释后涂布于分离培养基，待长出菌落后，挑选溶钙圈大的菌株，进行分纯后发酵培养，50 ℃恒温培养24 h。测定产酸情况，以L-乳酸产量和光学纯度为指标，筛选大量积累L-乳酸的优质菌株，获得本专利所述菌株，进行菌种鉴定实验，4 ℃保藏。 

本发明通过分离筛选出的能够高效利用玉米浸泡水、并且大量积累L-乳酸的产生菌，提高了玉米浸泡水的利用价值，从而实现显著的经济效益。 

具体实施方式

一株从玉米浸泡水中分离筛选出的L-乳酸产生菌，该菌株的16SrDNA核苷酸 序列如SEQ ID No.1所述，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No. 6382，保藏日期2012年7月19日，保藏单位地扯：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 

实验例1本发明所述菌株的分离筛选及鉴别方法。 

一、采用培养基 

1．MRS培养基：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，吐温-80 1 mL，K₂HPO₄ 2 g，NaAc·3H₂O 5 g，柠檬酸二铵2 g，MgSO₄·7H₂O 0.58 g，MnSO₄·H₂O 0.25 g，补蒸馏水至1000 mL，调pH至6.4±0.2；若配制成固体培养基，则需添加1.5%-2%的琼脂； 

2．L-肉汤培养基：胰酶解酪蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 5 g，葡萄糖100 g，补蒸馏水至1000 mL； 

3．YE培养基：酵母粉15 g，葡萄糖100 g，补蒸馏水至1000 mL，酵母粉和葡萄糖分别灭菌冷却后混合；若配制成固体培养基，则需添加1.5%的琼脂； 

注：以上培养基均121 ℃灭菌15 min。 

二、菌种的分离 

1、玉米浸泡液中乳酸菌的分离筛选，初筛： 

在无菌条件下，用5 mL一次性无菌针管吸取1 mL玉米浸泡液，10倍梯度稀释至10^-9；取0.1 mL涂布于MRS培养基，50 ℃培养24 h后选择有溶钙圈明显的典型菌落进一步划线分离，直到出现单菌落，挑取单菌落在L-肉汤培养基培养16 h后储存于15%～20%甘油中，于-60 ℃低温冰箱中冻存。 

将划线分离菌株于装有1 mL MRS液体培养基的EP管中活化，然后在10 mL YE液体培养基试管中静置培养24 h，测定发酵液的pH值。 

产酸菌会使培养基中的pH 值下降并导致含显色剂的培养液由紫变黄，这样可以通过目测法直观淘汰不产酸或产酸能力弱的菌株。取透明圈直径与菌落直径比值较大的菌株划线分离，共得到16株。将它们在EP管中活化培养后，接入装有YE液体培养基的试管中，50 ℃培养24 h，测定pH值见表1。 

表1初筛产酸菌的pH值