[发明专利]结球甘蓝组织培养方法

说明书

技术领域

本发明属于组织培养，特别是指一种结球甘蓝组织培养方法。

背景技术

结球甘蓝种子昂贵，又具有较长的苗龄期，为提高土地利用率，实践中多采用先育苗然后移栽定植的方法。由于结球甘蓝的幼苗为直根系，须根较少，不利于根部对营养物质和水分的吸收，移栽定植后生长缓慢，不耐水涝及根部病害，产量也不高。近年来，随着农业机械化的快速发展，精量播种、穴盘育苗、移栽机定植已引入结球甘蓝栽培，如何消除其上述的栽培缺陷、提高结球甘蓝产量，成为人们亟待解决的技术难题。

目前，结球甘蓝的组织培养技术在甘蓝雄性不育系无性快繁、优异稀有种质资源离体繁殖与保存、游离小孢子培养、细胞及原生质体培养中发挥重要的作用，尤其在结球甘蓝组培苗快速繁殖过程中应用居多。但利用目前结球甘蓝组织培养常用技术及在现有的结球甘蓝组织培养基上长期培养组培苗，容易造成组培苗逐渐衰退、丧失形态发生能力，表现为植株弱小、生长不良、增殖率下降。甚至部分组培苗出现玻璃化现象，嫩茎叶柄叶片出现半透明状和水渍状，使试管苗生长缓慢，且因其嫩茎不易诱导生根，使繁殖系数大为降低，玻璃化组培苗茎叶表面无蜡质，体内的极性化合物水平较高，细胞持水力差，植株蒸腾作用强，无法进行正常移栽。长期以往不利于结球甘蓝组培苗的继代培养、长期保存及生根移栽利用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结球甘蓝组织培养方法，以达到提高组培苗增殖率和生根率的目的。

本发明的整体技术构思是：

结球甘蓝组织培养方法，包括如下工艺步骤：

A、无菌苗的培养：将去杂后选出的优质结球甘蓝种子消毒，将消毒后的种子接种于MS培养基中进行暗培养后制成无菌苗，按照48ml-52ml培养基接种8-10颗种子的接种量接种，培养温度22℃-26℃，培养湿度70%-80%，培养周期9-12天；

B、诱导培养：将暗培养后的无菌苗子叶切成4mm×4mm的块，将胚轴切成3.6-4.2 mm，接种在诱导分化培养基上进行诱导培养，观察外植体在诱导培养过程中的变化和不定芽的诱导情况；诱导分化培养基的组成为：

MS+6-BA 2.0-3.0mg/L，NAA 0.1-0.2mg/L，蔗糖 25-30g/L，琼脂 6.5-7g/L，pH值=5.8；

诱导培养的培养条件为：温度24℃-26℃，光照强度1000-2000Lx，光照时间12小时/天，培养湿度70%-80%，培养周期25-35天；

C、增殖培养：将诱导的不定芽接种按照每瓶接种3-4个的接种量接种于体积为 48ml-52ml增殖培养基上进行增殖培养制成不定苗，25天继代1次，连续继代3次；

增殖培养培养基的组成为：

MS+6-BA 1.0-2.0mg/L，NAA 0.1-0.2mg/L，蔗糖25-30g/L,琼脂 6.5-7g/L ,pH值=5.8；

增殖培养的培养条件为：温度24℃-26℃，光照强度1000-2000Lx，光照时间12小时/天，培养湿度70%-80%；

D、生根培养：将不定苗分切后按照每瓶接种3-4个的接种量接种于体积为48ml-52ml生根培养基上进行生根培养，14天后观察生根情况；生根培养培养基的组成为：

1/2MS+NAA 0.1-0.2mg/L或1/2MS+IBA 0.2-0.3mg/L，蔗糖15-20g/L，琼脂5.5-6g/L,pH值=5.8；

生根培养的培养条件为：温度24℃-26℃，光照强度2200-2500 Lx，光照时间10-12小时/天，培养湿度70%-80%；

E、再生苗的移植：

当甘蓝组培苗产生根系并形成完整植株后，置于温室中炼苗，培养条件为：温度20℃-25℃，3天后将三角瓶或组培瓶的瓶塞打开，7天后取出，洗去根部琼脂，将其栽植于培养介质中，湿度为80%-90%，温度20℃-23℃，14天后定植于土壤进行正常管理。培养介质选用选用无土材质，一般选用蛭石，也可选用按一定比例复配的沙子、珍珠岩等材质，因其属于现有技术，申请人再次不再赘述。

本发明的具体技术方案还有：

步骤A中所述的去杂是将甘蓝种子在流水下冲洗，去掉杂质及灰尘。

选种的方式可以采用多种技术方案，并不影响本发明的实施，其中优选的技术方案是，步骤A中所述的选出优质结球甘蓝种子的步骤为将去杂后的结球甘蓝种子浸泡于水中，沉于水底的为优质结球甘蓝种子。