[发明专利]复方免疫增强剂、禽用灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及复方免疫增强剂、禽用灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

畜禽各类传染病的灭活疫苗，对防控这些疫病发挥了重要作用。使用灭活疫苗希望能够达到消除性免疫，即在接受某种疫苗免疫后，完全保护机体免受此类疫病的感染发发病，或者在感染后不排毒，不将病毒传播给其它动物。但现有疫苗在应用中仍存在一定的缺陷，疫苗质量有待于进一步改善。这些缺陷包括以下方面。

现有灭活疫苗免疫机体后抗体产生较慢，抗体持续期较短，抗体水平整齐度差。常规灭活疫苗免疫后3周，才能对同型病毒的攻击提供保护。由于动物个体间的抗体水相差较大，导致群体抗体离散度大。在规模化养殖条件下，群体中少部分动物因抗体水平较低而发病，可能会波及整群发病，带来灾难性的后果。临床生产中常规疫苗抗体持续期约为3-4个月。为了使抗体水平整齐度较好，同时使维持较高的抗体水平，一般需多次免疫。这将加大人力投入，同时增加对动物的应激反应，影响生产性能和饲料报酬。

通常，兽用灭活疫苗配制中抗原用量较多。一方面，疫苗抗原纯化工艺不成熟，表现在疫苗抗原中杂蛋白较多，导致副反应较大。另外一方面，现有禽用灭活多联疫苗在配制时需进行抗原浓缩，以保证疫苗中的抗原含量和疫苗的免疫效果，但增加疫苗的生产成本。临床生产亟需通过合适的技术方法，在保证较好的抗体水平情况下，有效降低抗原用量，降低副反应。

禽用细菌灭活苗存在免疫原性较弱，激发机体产生抗体效价低等缺陷。由副鸡嗜血杆菌为抗原制备的鸡传染性鼻炎疫苗也存在此类缺陷。但单纯从提高由副鸡嗜血杆菌抗原量来提高抗体效价，不但使得生产成本提高，也导致疫苗副反应增大，难以吸收。临床应用中需要一种技术克服以上缺点。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种复方免疫增强剂，该复方免疫增强剂能够缩短现有疫苗免疫窗口期，显著提高抗体效价，提高抗体整齐度，延长抗体持续期，有效降低抗原用量和产生消除性免疫。

本发明的目的之二是提供复方免疫增强剂的制备方法，该方法简单易操作。

本发明的目的之三是提供禽用疫苗，该禽用疫苗含有上述复方免疫增强剂，疫苗的免疫窗口期缩短，抗体效价高，抗体整齐度高，抗体持续期长，抗原用量降低，并且能够产生消除性免疫。

本发明的目的之四是提供所述禽用疫苗的制备方法，该方法简单易操作。

采用如下技术方案实现实现上述目的：

一种复方免疫增强剂，含有0.5～100 μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～1000 μg/mL的α-半乳糖基神经酰胺、5～2000μg /mL的β-葡聚糖和5～2000μg /mL的左旋咪唑，所述含CpG基序的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。

该复方免疫增强剂含有0.5～5μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～100μg/mL的α-半乳糖基神经酰胺、5～200μg/mL的β-葡聚糖和5～10μg/mL的左旋咪唑。

该复方免疫增强剂含有5～100μg/mL的含CpG基序的核酸序列、100～1000μg/mL的α-半乳糖基神经酰胺、200～2000μg /mL的β-葡聚糖和10～2000μg /mL的左旋咪唑。

一种制备所述复方免疫增强剂的方法，包括下述步骤：

（1）配制水相溶液：在磷酸盐缓冲液中加入含CpG基序的核酸序列、α-半乳糖基神经酰胺、β-葡聚糖和左旋咪唑，然后加入吐温-80，配制成水相溶液；

（2）配制油相溶液：在白油中加入司盘-80配制成油相溶液；将所述水相溶液与油相溶液充分混合，即得所述复方免疫增强剂。

所述禽用疫苗含有0.5～100μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～1000μg/mL的α-半乳糖基神经酰胺、5～2000μg/mL的β-葡聚糖、5～2000μg /mL的左旋咪唑和灭活疫苗抗原；所述含CpG基序的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述禽用疫苗优选含有0.5～5μg/mL的含CpG基序的核酸序列、0.5～100μg /mL的α-半乳糖基神经酰胺、5～200μg /mL的β-葡聚糖和5～10μg/mL的左旋咪唑和灭活疫苗抗原。

所述禽用疫苗优选：含有5～100μg/mL的含CpG基序的核酸序列、100～1000μg/mL的α-半乳糖基神经酰胺、200～2000μg /mL的β-葡聚糖和10～2000μg /mL的左旋咪唑和灭活疫苗抗原。