[发明专利]诊断奶牛隐性乳房炎的试剂、试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种诊断试剂，尤其涉及一种诊断奶牛隐性乳房炎的试剂以及由该试剂制备成的试纸条，本发明进一步涉及它们的制备方法及在临床诊断奶牛隐性乳房炎中的应用，属于奶牛隐性乳房炎的诊断领域。

背景技术

奶牛乳房炎是奶牛业发病率最高、引起经济损失最严重的疾病之一。全世界每年仅乳房炎一项所造成的损失就高达350亿美元，中国由于乳房炎所造成的损失每年约50多亿美元。根据乳房和乳汁有无肉眼可见变化，奶牛乳房炎分为临床型乳房炎和隐性乳房炎两种类型。奶牛隐性乳房炎，一般不表现临床症状或由于其临床症状不明显，难于发现而常常被人们所忽视，但其发病率极高，当发展为临床型乳房炎时，就失去最佳的治疗时间。所以在奶牛隐性乳房炎阶段及时作出诊断，可减轻其对奶牛乳腺的损伤及产奶量和奶质的影响。据统计，中国隐性乳房炎阳性率为46.4-85.7%，奶牛隐性乳房炎的诊断一直是制约奶牛养殖业的难题。

国内外对奶牛乳房炎的早期诊断均进行了大量的研究，并取得了可喜的研究成果，但这些科研成果并没有在基层得到很好的应用与推广，主要原因是理论与生产实际脱节或高昂的费用，基层难以承担，如亚细胞水平方面的诊断与治疗，技术高难，要求有专业人员开展相关工作，但基层缺乏这样人员配备，所以无法推广与实施；二是理论性强，不具备应用价值，如机理方面的研究；三是监测需要昂贵的设备与专业人员，而中国基层难以达到这一要求；四是费用太高，基层难以承担，如一些生物学方面的检测试剂盒及研发的新的抗生素药物等。

国外关于隐性乳房炎诊断主要集中在体细胞监测及对奶中成分的监控，现在被美、德、法等许多国家作为监测和控制奶牛隐性乳房炎的主要措施。如丹麦研制FossRBentley SomacountCC-150型体细胞分析仪等，可以及时发现隐性乳房炎，但检测设备和费用较高，不适合中国基层推广应用。在乳房炎诊断方面，国内目前采用的是CMT法或CMT改良法，这些方法基本原理就是诊断液与乳汁混合后出现絮状沉淀，根据沉淀的出现时间及量判断乳房炎程度，这些方法一是存在主观判断不确定性，判断标准难以精确界定，不同的人主观标准不一样，结果也不一样，假阴性高；另一就是需要检测人员具有一定的专业知识，也限制其临床推广应用。故研制一种适合于基层工作人员使用的简便、快捷、经济实惠的隐性乳房炎诊断试纸，对奶牛养殖业的健康发展具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种简便、快捷、准确的诊断奶牛隐性乳房炎的试剂；

本发明的目的之二是提供一种制备所述诊断奶牛隐性乳房炎试剂以及由该试剂所制备的诊断试纸条的方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

一种诊断奶牛隐性乳房炎的试剂，包括以下组分：儿茶酚紫，中性红，石蕊，耐尔蓝A，α－萘酚苯甲醇；

优选的，各组分的重量份是：儿茶酚紫0.2-2份，中性红1-10份，石蕊20-80份，耐尔蓝A 5-20份，α－萘酚苯甲醇1-10份；

更优选的，各组分的重量份是：儿茶酚紫0.5-1.5份，中性红2-8份，石蕊40-60份，耐尔蓝A 8-15份，α－萘酚苯甲醇2-8份；

最优选的，各组分的重量份是：儿茶酚紫1份，中性红5份，石蕊50份，耐尔蓝A 10份，α－萘酚苯甲醇5份。

本发明中所述的“儿茶酚紫”又名为“邻苯二酚紫”。

本发明中所述“中性红”的学名是“3-氨基-7-甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐”，是细胞活体染色和酸碱性指示剂的一种碱性吩嗪染料。

本发明中所述耐尔蓝A又名为硫酸尼罗蓝。

本发明中所用到的所有组分或原料都能通过商业途径购买得到，其规格符合行业标准。

本发明提供了一种由所述诊断奶牛隐性乳房炎试剂制备得到诊断液的方法，包括以下步骤：

（1）将儿茶酚紫以及中性红分别用水溶解，备用；

（2）将耐尔蓝A以及α－萘酚苯甲醇分别用冰醋酸溶解，备用；

（3）将石蕊用乙醇回流煮沸，静置，倾去上层清液；将下层沉淀再用相同方法处理2次；残渣用水洗涤，倾去水洗液，再加水煮沸，放冷，滤过得石蕊溶液，备用；

（4）将步骤（1）、（2）和（3）所得到的五种备用液混均，调整pH至7.2-7.5，加水定容，静置，即得。

其中，步骤（3）中所述的乙醇优选为浓度95％的乙醇40mL；所述的回流煮沸时间优选为1小时。