[发明专利]一种甲型H1亚型流感病毒抗体阻断ELISA试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明涉及动物病毒学与免疫学检测技术领域。具体地说，本发明涉及一种甲型H1亚型流感病毒抗体阻断ELISA检测试剂盒，还涉及一种甲型H1亚型流感病毒抗体阻断ELISA检测试剂盒在猪群中甲型H1亚型流感病毒抗体检测的用途。

背景技术

2009年3月，墨西哥部分地区出现大量的流感样病例及严重呼吸道感染病症，4月15日和4月17日，美国CDC在两例病例背景相互独立的临床样品中检测到了同一种新型的HA亚型流感病毒，即甲型H1N1病毒，随后证实该病毒即为导致3月份流感样病例的病原。在随后的不到6周时间内，疫情在美国、墨西哥、加拿大以外的国家和地区爆发。2009年6月世界卫生组织宣布对甲型（H1N1）流感的警戒级别升至6级，意味着甲型（H1N1）流感的世界性大流行已形成。最近一次流感的世界性大流行起源于墨西哥，一开始被称为猪流感（Swine flu），随后根据病毒的分析，改称为猪源性流感病毒感染（swine origin influenza virus infection，简称S-OIV infection），最后为了与人的季节性流感A(H1N1)区别，改称新流感A(H1N1)，在我国则称为甲型H1N1流感。甲型H1N1流感对人及动物的健康造成巨大的影响，而且对经济造成了巨大的损失。

1975年，Kohler G和Milstein C在Nature杂志上发表了细胞融合法建立杂交瘤技术，创建了具有划时代意义的杂交瘤单克隆抗体技术。经克隆后产生结构和各种特性完全相同的高纯度抗体，称为单克隆抗体（Monoclonal Antibody，McAb），简称单抗。单克隆抗体技术的发现和使用，对现代生命科学研究的发展起到了巨大的推动作用，已经成为生物技术领域的一个重要方面。迄今，该技术的应用已经广泛应用于基础研究、疾病诊断、治疗、预防等方面。

1971年瑞典的Engvall等人分别以纤维素和聚丙乙烯试管作为固相载体吸附抗原/抗体，建立了酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosrbent Assay，简称ELISA方法）。1974年Voller等人改用聚苯乙烯微量反应板作为固相免疫吸附载体，使ELISA方法得以推广应用，使得用于抗原定位的酶标记抗体技术发展成为液体标本中微量物质的测定方法，并逐渐成为抗原抗体检测中最为常用的一种方法。它将酶标记物同抗原抗体复合物的免疫反应与酶的催化放大作用相结合，既保持了酶催化反应的敏感性，又保持了抗原抗体反应的特异性，因而极大的提高了灵敏度。同时它又是一种非均相免疫分析方法，即在反应的每一步都有洗涤过程，从而除去了未反应物和干扰物质。由于ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、检测迅速和非放射性以及可以批量测定等诸多优点，使得ELISA方法得到了越来越广泛的应用。（焦奎等.酶联免疫分析技术及应用[M].北京：化学工业出版社，2004,84～141；李文敏.酶联免疫吸附反应的技术进展及应用[J].湖北职业技术学院学报，2003,4（6）:65～69）。尤其是阻断ELISA，在亚型特异性鉴定中具有很大优势。阻断ELISA(b-ELISA)基本原理是将病原抗原固定在酶标板中，加待检血清样品孵育，随后加入针对包埋抗原的酶标单克隆抗体，若待检血清中含有针对包被病原的特异性抗体，则酶标抗体不与或少量的同包埋抗原结合，反之，酶标单抗将与包埋抗原发生结合反应，显色后，血清中特异性抗体越多OD值越低，反之OD值越高。b-ELISA中，由于包被的抗原纯度很高，且单克隆抗体具有很高的抗原识别特异性，因此能解决了间接法中抗原抗体之间的非特异性反应以及交叉反应。由于b-ELISA具有鉴别诊断的优势，故常被用于不同血清型毒株间的鉴别诊断。

酶标记抗体技术是ELISA检测方法的关键技术，本发明中所用的酶标记抗体是本实验室自行生产抗甲型H1亚型流感病毒血凝素单克隆抗体，经过辣根过氧化物酶（简称HRP）标记，具有很高的酶活性，产量高及成本低。

发明内容

本发明的主要目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种甲型H1亚型流感病毒抗体阻断ELISA检测试剂盒，具有特异性强，灵敏度高，检测时间短，解决了甲型H1亚型流感病毒抗体检测的问题。

本发明的另一个目的是在于提供了一种甲型H1亚型流感病毒抗体阻断ELISA检测试剂盒在甲型H1亚型流感病毒抗体检测中的应用。操作简单易行，不需由专业人员操作。本发明的试剂盒稳定性好、保存期长，在4℃条件下放置半年不会影响其敏感性。

本发明是这样实现的：

一种甲型H1亚型流感病毒抗体阻断ELISA检测试剂盒，该试剂盒由以下物质组成：