[发明专利]一种糖敏灵制剂中14种化学成分的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于现代中药应用领域，特别涉及一种糖敏灵制剂中化学成分的检测方法。

背景技术

糖敏灵丸是在临床验证的有效方开郁清胃颗粒基础上加减变化与剂型改革而成。糖敏灵丸由黄连、大黄、黄芩、白芍、柴胡、枳实、山楂、乌梅、半夏、天花粉共十味常用中药组成，具有开郁清胃、滋阴降火、通腑泻浊之功效。临床观察证实其对Ⅱ型糖尿病的血糖有明显的改善作用，尤其是对体型偏胖的早中期Ⅱ型糖尿病患者效果更加显著。同时，药理实验揭示糖敏灵能显著增强高热量饲料诱导的胰岛素抵抗模型糖尿病大鼠和自发性Ⅱ型糖尿病大鼠的胰岛素敏感性。

为使糖敏灵药物生产标准化，达到疗效确切，质量稳定的目的，需要准确检测糖敏灵制剂的化学成分。糖敏灵丸所含的药物成分中，可以确定的药物活性物质包括：柚皮苷、黄芩苷、新橙皮苷、盐酸小檗碱、黄芩素、汉黄芩素，橙皮苷、盐酸药跟碱、盐酸黄连碱、汉黄芩苷、盐酸巴马亭、柚皮素、千层纸素A、白杨素。这些物质均属于已知物质，为更加全面控制糖敏灵制剂的质量，建立满足中药现代化的质量控制标准，需要一种可以同时检测糖敏灵制剂中多种化学成分的分析方法。

发明内容

为使糖敏灵药物生产标准化，达到疗效确切，质量稳定的目的。本发明提供了一种检测本发明制剂中14种药物活性物质的方法，该方法采用HPLC法对其中的药物活性物质同时进行含量测定。该方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的“安全、均一、稳定、有效、可控”。

本发明提供了一种糖敏灵制剂中化学成分的测定方法，技术解决方案如下：

检测样品采用甲醇提取，然后采用高效液相色谱进行检测，色谱条件为采用C₁₈色谱柱，流动相A相为乙酸或磷酸或甲酸或十二烷基磺酸钠水溶液，B相为乙腈或甲醇，检测器为二极管阵列检测器。

根据本发明实施方式之一，检测样品采用甲醇超声提取。

根据本发明的实施方式之一，流动相A相为pH为3-5的醋酸盐缓冲液，含体积比为0.2%-0.8%的三乙胺，B相为乙腈。

优选的，A相为pH3.5的醋酸盐缓冲液，含体积比为0.5%的三乙胺，B相为乙腈，采用梯度洗脱，梯度洗脱方法为：

0～24min，19%B相→20%B相；

24～30min，20%B相→25%B相；

30～35min，25%B相→35%B相；

35～55min，35%B相→55%B相。

考察了多种流动相系统，包括甲醇-磷酸-水系统、乙腈-磷酸-水系统、乙腈-磷酸-磷酸二氢钾-水系统和乙腈-冰醋酸-三乙胺-水系统，结果表明在流动相中加入冰醋酸或磷酸可以提高黄酮类成分的分离度，而加入三乙胺作为离子对试剂，可以使生物碱类成分的分离度和峰形得到极大改善，因此优选乙腈-冰醋酸-三乙胺-水系统为流动相系统。

试验考察了三乙胺浓度为0.2%，0.5%，0.8%时，生物碱成分的色谱行为，结果表明当三乙胺浓度为0.5%时，各峰之间分离度好，峰形锐。

考察了pH值对待测样品色谱行为的影响。结果表明，pH在3-5范围内，随着pH值增加，黄芩苷和汉黄芩苷的保留能力增强，而4种生物碱的保留能力增加，但部分待测组分色谱峰重叠，因此优选A相pH值为3.5。

根据本发明的另一实施方式，流动相流速为0.8-1.2mL/min。

优选地，流动相流速为1.0mL/min。

根据本发明的再一实施方式，色谱柱温为25-35℃。

优选地，色谱柱温为30℃。

优选地，柱温为30℃。发明人考察了柱温(不控温、25℃、30℃、35℃)对分离效果的影响使用，结果表明柱温30℃的情况下，制剂中待测组分峰形对称，分离度高且分析结果稳定。

根据本发明的再一实施方式，检测器波长为220-345nm。

优选地，检测器波长为278nm。

实验表明：黄酮类成分在278nm有最大吸收，生物碱类成分在278nm和345nm处有最大吸收。选择278nm为检测波长，各指标成分吸收较强且干扰成分少。