[发明专利]一株可合成苦参碱的苦豆子内生真菌及其应用和其发酵液的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株可合成苦参碱的苦豆子内生真菌及其应用和其发酵液的应用。 

背景技术

苦豆子(Sophora alopecuroides L)是豆科槐属多年生草本植物，广泛分布于我国宁夏、甘肃、内蒙古、新疆等西部省区的荒漠、半荒漠草地。苦豆子全草、根、种子可入药，用于抗肿瘤、抗病毒、抗菌消炎、清热解毒、消肿止痛、止痢、杀虫等，其有效成分主要为苦参碱等喹诺里西啶类生物碱，具有重要的医疗和研究价值。苦豆子抗寒耐旱耐盐碱、固氮作用强，是西北地区防风固沙、维持西部草原生态平衡的重要沙生植物。但近年来，随着临床医疗对苦豆子生物碱需求的不断增加，人为的滥采滥挖致使野生苦豆子储量急剧下降，大批草场退化，水土流失，严重威胁着苦豆子植物资源的可持续开发和利用以及西部草地的生态平衡。 

目前，人们主要对苦豆子内生细菌、内生放线菌进行了研究，但苦豆子内生真菌的研究较少。王兰等(2007)对苦豆子内生真菌进行研究，分离出1株对小麦赤霉等6种病原菌具有不同程度抑制作用的内生真菌，与苦豆子生物碱的作用相近；顾沛雯等从苦豆子中分离到214株内生真菌，167株具有抑菌活性。但苦豆子中合成喹诺里西啶类生物碱内生真菌的研究还未见报道。产生喹诺里西啶生物碱的苦豆子内生真菌的开发，将是解决苦豆子植物资源日益匮乏的有效途径，具有重要的研究价值和广阔应用 前景。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一株可合成苦参碱的苦豆子内生真菌，利用苦豆子内生真菌能够通过微生物发酵合成苦参碱等苦豆子的主要有效成分； 

本发明的目的之二是提供一种上述苦豆子内生真菌的应用，其能够用于合成苦参碱； 

本发明的目的之三是提供一种上述苦豆子内生真菌发酵液的应用，该发酵液对金色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌具有不同程度的抑菌作用。 

一株可合成苦参碱的苦豆子内生真菌，是苦豆子内生真菌枝顶孢属(Acremonium sp.)SA_NX E3 CCTCC NO.M 2012213。 

一株用于直接利用真菌发酵产生苦参碱的苦豆子内生真菌枝顶孢属(Acremonium sp.)SA_NX E3 CCTCC NO.M 2012213。 

一株其发酵液用于抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌的苦豆子内生真菌枝顶孢属(Acremonium sp.)SA_NX E3 CCTCC NO.M2012213。 

本发明的苦豆子内生真菌，可以通过微生物发酵合成苦参碱等苦豆子主要有效成分，从而开发新的微生物资源，为野生苦豆子植物资源的保护和利用提供了依据。并且本发明的苦豆子内生真菌可直接利用真菌发酵产生苦参碱，与植物栽培产生苦参碱相比，具有效率高，周期短，不受季节、气候、地理条件等因素的限制，经过试验证明，可通过实验室或工业发酵来生产苦参碱。 

附图说明

附图1为本发明菌株SA_NX E3提取物中保留时间为25.597min的色谱峰的离子碎片质谱图； 

附图2为菌株SA_NX E3的菌落图； 

附图3为本发明菌株SA_NX E3的显微形态； 

附图4为本发明菌株SA_NX E3的NJ系统发育树。 

具体实施方式

本发明提供了一株苦豆子内生真菌枝顶孢属(Acremonium sp.)SA_NXE3 CCTCC NO.M 2012213(以下简称“菌株SA_NX E3”)，该菌株保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为中国湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCC NO.M 2012213，保藏日期为2012年6月10日，经真菌分类学鉴定为枝顶孢属(Acremonium sp.)。该菌可产生具有多种药理活性作用的喹诺里西啶生物碱——苦参碱，其发酵液对金色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌具有不同程度的抑菌作用。 

一、菌株SA_NX E3的分离和筛选： 

(1)样品准备：采集宁夏平罗县新鲜无病害的结荚期全株苦豆子植物，放入冰盒中，于12h内进行内生真菌分离。用自来水冲去植物表面泥土，用剪刀将叶、茎、种子、根分离，分别放入灭菌的玻璃平皿中进行表面消毒。 

(2)植物样品表面消毒：先用体积分数为75％的酒精漂洗20～30s，用灭菌去离子水漂洗3～5次；再用有效氯质量分数为1％的次氯酸钠溶液漂洗2～3min，用灭菌去离子水漂洗3～5次。