[发明专利]一种人心肌脂肪酸结合蛋白酶促化学发光免疫检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体提供了一种人心肌脂肪酸结合蛋白酶促化学发光免疫检测方法和试剂盒，适用于人心肌脂肪酸结合蛋白的酶促化学发光检测分析。

背景技术

人心肌脂肪酸结合蛋白（FABP）是一种重要的细胞内脂肪酸结合蛋白。其分子量较小为15kD的胞浆蛋白，大量存在于心肌组织中，其在心肌中的含量比骨骼肌高10倍，在肾、肝、小肠含量很低。它在心肌细胞内干预游离脂肪酸的细胞内运输，提供心肌细胞能量。心肌缺血导致心肌细胞坏死，h-FABP从心肌细胞渗漏到血液中，从而使外周血的h-FABP上升。AMI出现后6h内血中升高的生化标志物为早期标志物，h-FABP在AMI发生后1～2h立即升高，并持续至12h，保持较高水平和较高的敏感性，在24h左右恢复并接近正常水平，成为理想的诊断AMI的早期生化标志物。

目前人心肌脂肪酸结合蛋白的检测方法主要有酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）和胶体金免疫层析法（Gold-immunochromatography assay，GICA）。ELISA方法具有操作简单、技术可靠、试剂方便易得等优点，但其敏感性、特异性不够高，作为定量方法不够准确；GICA方法简便、快速、可单份或成批测定,但其灵敏度更低于ELISA方法，而且通常情况下只能做为定性方法，而不能作为定量方法。

化学发光(ChemiLuminescence，简称为CL)分析法是分子发光光谱分析法中的一类，其原理是在化学反应中生成的不稳定的激发态中间体，当其回到基态时，释放光子。化学发光分析法主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。在免疫检测分析中，使用化学发光技术，可以使检测的范围达到6个数量级，而且灵敏度很高，达10^-18摩尔水平，加上标记物稳定，有效期长，使其受到越来越多的关注与应用。

但目前尚没有利用化学发光分析法测量人心肌脂肪酸结合蛋白的研究和应用。

发明内容

为了进一步提高人心肌脂肪酸结合蛋白检测的敏感性、特异性和准确度，发明人将酶促化学发光分析方法应用于人心肌脂肪酸结合蛋白的检测中，经过大量的实验，摸索出一种灵敏、准确且稳定的检测方法，由此完成了本发明。

本发明一个方面涉及一种人心肌脂肪酸结合蛋白检测方法，其包括以下步骤：

（1）将固相化抗人心肌脂肪酸结合蛋白抗体固定在固相表面，加入待测样本和标记的抗人心肌脂肪酸结合蛋白抗体，温育，然后用洗涤液洗涤；任选地，同时设立人心肌脂肪酸结合蛋白标准品的对照；

（2）加入化学发光底物工作液，放置一段时间；

（3）测量发光值，得到待测样本的人心肌脂肪酸结合蛋白浓度值。

其中步骤（1）中的温育为，在18-42℃条件下，优选为20-37℃条件下，温育5-120min，优选为温育10-60min，更优选为15-45min，在本发明的一个实施方案中，在37℃条件下，温育30min。

其中步骤（2）中的放置放一段时间是指1-30min,优选为2-20min。在本发明的一个实施方案中，放置时间为5min。

具体地，检测方法如下：

1．在固定有抗人心肌脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的聚苯乙烯微孔板中加入5-100μL血清或血浆样本，标准品，混匀；加入5-100μL辣根过氧化物酶标记的抗人心肌脂肪酸结合蛋白单克隆抗体，37℃温育10-60分钟。在本发明的一个实施方案中，温育30min。

2．洗涤：可采用手工洗涤或洗板机洗涤。手工操作方法为：直接排除包被板中的液体，并加入洗涤液（300μL/孔），倒出洗涤液并拍击以除去挂壁液体，重复三次，洗板机操作见仪器说明书。

3．加入化学发光底物工作液：每孔加入50-400μL，所述发光底物工作液包括底物溶液、辅助发光溶液和反应增强剂。混匀后2-20分钟测量。

4.读取发光值：在发光测定仪上测定每孔的发光值。

本发明的另一方面涉及人心肌脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其包括：连接有抗人心肌脂肪酸结合蛋白抗体的微孔板，标记的抗人心肌脂肪酸结合蛋白抗体和化学发光底物工作液。

在本发明中，所述化学发光底物工作液包括底物溶液、辅助发光溶液和反应增强剂。

在本发明中，所述试剂盒还可以包括洗涤液，人心肌脂肪酸结合蛋白标准品和质量控制血清。