[发明专利]一种紫外光谱法测定三聚氰胺含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种光谱法测定三聚氰胺的分析方法。特别是基于三聚氰胺与脱氧核糖核酸(DNA)相互作用而建立的简单、快捷、准确的紫外光谱法测定三聚氰胺含量的方法。

背景技术

三聚氰胺(Melamine,以下简称MM，分子式C₆H₆N₆是一种用途广泛的化工原料，分子中含氮量达66.6％。一些不法企业将其添加到牛奶、奶制品、饲料中，造成粗蛋白质虚高的假相，不仅对奶制品、养殖业等产业产生不利影响，对人类健康也存在着严重威胁。虽然2008年9月发生的令人震惊的“三聚氰胺”事件在国家相关部门的高度重视下，应急处理工作已告一段落，但有关三聚氰胺的检测技术的研究一直是近年来的热点话题。

研究和建立测定食品、乳制品及组织样品中的三聚氰胺含量的高灵敏度、快速简便的方法具有十分重要的意义。目前关于三聚氰胺的测定方法有GC-MS,HPLC,LC-MS,毛细管电动色谱等，这些方法中有的需要比较复杂的样品预处理，操作繁琐，有的方法检测灵敏度比较低（通常的检测灵敏度在10.9μg/kg~0.25mg/kg之间），难以满足日常的快速检测。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种准确有效测定，并且可靠、快速、操作简单的紫外光谱法测定三聚氰胺含量的方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种紫外光谱法测定三聚氰胺含量的方法，该方法包括以下步骤：

（1）配制pH值4~10的三羟甲基氨基甲烷(Tris)-HCl缓冲溶液；

（2）用步骤（1）配制的Tris-HCl缓冲溶液分别配制浓度范围为0~10μgL的三聚氰胺溶液、浓度范围为1.0×10^-5mol/L~1.5×10^-4mol/L的DNA溶液，以及三聚氰胺与DNA的混合溶液,摇匀,放置2~30min,以试剂空白（即步骤（1）配制的Tris-HCl缓冲溶液）为参比,在200~500nm波长范围扫描紫外光谱，测定各溶液的吸光度（A）；

（3）以三聚氰胺溶液的浓度为横坐标、以不加三聚氰胺时DNA的吸光度即DNA溶液的吸光度与三聚氰胺与DNA的混合溶液的吸光度的差值（ΔA）为纵坐标，建立工作曲线；

（4）将三聚氰胺待测提取液加入上述步骤（2）浓度相同的DNA溶液（此处的DNA溶液具体指的是与步骤（2）中配置的DNA溶液浓度相同的溶液，确保与标准曲线建立时用的DNA浓度一致即可）中，测定体系的吸光度，根据工作曲线计算待测液中三聚氰胺的浓度，换算出待测提取液中三聚氰胺的相应含量。

其中，所述DNA为鲱鱼精DNA、小牛胸腺DNA（均为市售产品）的任意一种，其纯度通过比较260nm和280nm处的吸光度来确定(A₂₆₀/A₂₈₀＝1.8～1.9/1)，用pH＝7.00的Tris(0.05mol/L)-HCl缓冲溶液配制成DNA溶液，浓度通过测定260nm处的吸光度计算而得(ε=6600L·mol^-1·cm^-1)，储备液置于4℃保存。

进一步，本发明所述DNA的使用浓度范围为：1.0×10^-5mol/L~1.5×10^-4mol/L（此处DNA的使用浓度即是指加入缓冲液后DNA在溶液中的浓度，同理，三聚氰胺和三聚氰胺与DNA混合溶液均为配制后最终浓度）；三聚氰胺的检测线性范围为：0-2.0μg/L，方法检测限为0.056μg/kg。

上述步骤（1）中三羟甲基氨基甲烷在缓冲液中的浓度优选为0.05mol/L，配置的pH优选＝7.00。

上述步骤（2）所述三聚氰胺与DNA的混合溶液是指：在步骤（1）配置的三羟甲基氨基甲烷(Tris)-HCl缓冲溶液中加入DNA和三聚氰胺，使得配制后的混合溶液中三聚氰胺的浓度为0~10μgL、DNA的浓度为1.0×10^-5mol/L~1.5×10^-4mol/L。本发明的优点和有益技术效果为：

本发明的三聚氰胺与脱氧核糖核酸(DNA)会发生相互作用，并使得DNA在～260nm处的特征吸收峰位置出现小的红移(～2nm)和减色效应(吸光度A减小～0.05，～10%)，且其减色效应与三聚氰胺浓度符合朗伯-比尔定律，因此，通过紫外光谱法可以实现三聚氰胺的含量准确有效测定，并且可靠、快速、操作简单。

附图说明